REM期睡眠剝奪對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶以及海馬神經(jīng)發(fā)生的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)觀察快速眼動(dòng)期睡眠剝奪72小時(shí)以及睡眠恢復(fù)12小時(shí)后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力、海馬神經(jīng)發(fā)生情況和突觸可塑性的變化，探討REM期睡眠剝奪對(duì)認(rèn)知功能的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　60只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組:①普通鼠籠對(duì)照組(CC)，②REM期睡眠剝奪組(SD)，③睡眠恢復(fù)組(RS)。各組再分為5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)注射組(n=10)

2、和未注射藥物組(n=10)。采用改良多平臺(tái)水環(huán)境法(modifiedmultipleplatformmethod，MMPM)剝奪大鼠REM期睡眠72小時(shí)，然后利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力。BrdU注射組大鼠在睡眠剝奪時(shí)開始給予腹腔注射BrdU100mg/kg，每天2次，持續(xù)7天，Morris水迷宮任務(wù)結(jié)束后取材，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法(Immunohistochemistry，IHC)觀察大鼠海馬細(xì)胞增殖情況，并利用

3、免疫組化三標(biāo)法對(duì)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行鑒定。運(yùn)用蛋白質(zhì)免疫印跡法(WesternBlot)對(duì)海馬N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartatereceptor，NMDAR)2B亞型(NR2B)和突觸后致密物(postsynapticdensity，PSD)PSD-95進(jìn)行選擇性半定量分析。采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deoxynucleotidyltransferase-med

4、iateddUTP-biotinnickendlabeling,TUNEL)觀察大鼠海馬細(xì)胞凋亡情況。睡眠恢復(fù)組在REM期睡眠剝奪72小時(shí)后自由恢復(fù)睡眠12小時(shí)，再進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)、免疫組織化學(xué)染色、蛋白免疫印跡以及TUNEL法檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中，SD組與RS組大鼠平均逃避潛伏期比CC組明顯較長(zhǎng)。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，SD及RS組在平臺(tái)所在象限游泳的時(shí)間百分比均小于CC組。與SD組

5、相比，RS組大鼠平均逃避潛伏期較短，平臺(tái)所在象限游泳時(shí)間百分比較大。各組大鼠游泳速度相差不顯著。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，鏡下海馬齒狀回區(qū)可見典型的BrdU陽(yáng)性細(xì)胞，胞核內(nèi)著色，呈深棕黃色顆粒，無(wú)胞質(zhì)及胞膜著色，細(xì)胞形狀不規(guī)則。SD組及RS組每張切片BrdU陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)均明顯少于CC組(P＜0.01），但是RS組與SD組相比無(wú)顯著性差異。免疫組化三標(biāo)法對(duì)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行鑒定，DCX陽(yáng)性細(xì)胞所占比例最大，各組中BrdU/DCX、BrdU

6、/GFAP雙陽(yáng)性細(xì)胞的百分比相差不顯著。WesternBlot結(jié)果顯示，SD組及RS組大鼠海馬NR2B和PSD-95含量明顯低于CC組，相差具有顯著性（P＜0.05）。與SD組相比，RS組海馬NR2B和PSD-95的表達(dá)增加。CC組、SD組及RS組各組海馬區(qū)均未見TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞。
　　結(jié)論：
　　REM期睡眠剝奪會(huì)造成大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，抑制海馬齒狀回神經(jīng)細(xì)胞增殖，降低海馬NR2B、PSD-95含量，睡眠恢復(fù)后大鼠學(xué)習(xí)