GDDR在胃癌和胃粘膜損傷中的作用.pdf

1、【背景】
　　GDDR（GastricDrasticDown-Relatedgene）是我們課題組率先發(fā)現(xiàn)并登陸GenBank的基因，編碼推導其翻譯蛋白為18.31kDa的分泌蛋白。我們前期研究發(fā)現(xiàn)GDDR特異性表達于胃腸道粘膜上皮，高豐度表達于胃粘膜，表達位置為胃粘膜表層上皮小凹細胞。
　　胃粘膜層中合成并分泌大量保護胃粘膜的蛋白，含量最豐富的是糖蛋白分子Mucin，其次是三葉草因子家族TFF（trefoilfactorf

2、amily）。三葉草因子家族中的TFF1、TFF2在胃粘膜的良惡性疾病中發(fā)揮了多種功能。TFF是重要的胃粘膜保護和修復分子，可通過調(diào)節(jié)胃粘膜細胞的增殖、分化和凋亡，促進細胞-細胞粘附以及細胞-基質(zhì)粘附，促進細胞遷移，調(diào)節(jié)粘蛋白和胃酸的分泌，促進胃粘膜損傷后新生血管形成等多種途徑發(fā)揮胃粘膜保護功能。TFF在胃癌中既可通過抑制腫瘤增殖發(fā)揮其抑癌作用，又能促進腫瘤侵襲發(fā)揮促癌作用。
　　研究表明，GDDR可與TFF1、TFF2特異性結(jié)合

3、并共同特異表達于正常胃粘膜上皮，我們前期實驗還發(fā)現(xiàn)GDDR能上調(diào)TFF1的表達。因此我們認為GDDR也在胃粘膜的良惡性疾病中具有重要的功能，作用機制可能與TFF分子密切相關(guān)。本課題圍繞GDDR在胃癌和胃粘膜保護中的作用進行了初步探討。
　　【目的】
　　分析GDDR與胃癌診斷及預后的相關(guān)性；研究GDDR與TFF1的結(jié)合在胃癌中的作用；建立GDDR遺傳修飾小鼠模型；探討GDDR的胃粘膜保護作用；制備GDDR單克隆抗體。

4、　　【方法】
　　利用免疫組化Real-timePCR分析GDDR在正常胃粘膜、胃癌和細胞系中的表達水平，結(jié)合胃癌患者的臨床病理和隨訪資料分析GDDR與胃癌預后的相關(guān)性；通過GDDR位點突變使其蛋白不能與TFF1結(jié)合后分析對細胞表型的影響；建立GDDR轉(zhuǎn)基因小鼠并購買GDDR基因敲除小鼠，并利用小鼠胃粘膜損傷模型分析GDDR的胃粘膜保護作用；應用雜交瘤技術(shù)制備GDDR單克隆抗體。
　　【結(jié)果】
　　GDDR在所有癌旁正

5、常組織及組織芯片的正常胃粘膜中都陽性表達，在胃癌中的陽性率明顯降低，細胞系實驗也說明GDDR在胃癌細胞系的表達較胃粘膜細胞系明顯降低，且GDDR的低表達與腫瘤的低分化及生存率明顯相關(guān)；成功構(gòu)建了GDDR位點突變載體及建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）-GDDRmut的人胃癌SGC-7901細胞系。Real-timePCR結(jié)果表明，GDDR及GDDRmut都能促進TFF1的表達，GDDR突變后也可能具有抑制腫瘤細胞增殖的作用，但與未突變

6、時相比，抑制效應較弱；未發(fā)現(xiàn)GDDRmut的促細胞凋亡及調(diào)控VEGF表達的現(xiàn)象；成功構(gòu)建Capn8-GDDR-IRES-EGFP轉(zhuǎn)基因小鼠；利用GDDR基因敲除、轉(zhuǎn)基因和野生型小鼠進行急性胃粘膜損傷實驗發(fā)現(xiàn)，GDDR的功能缺失與胃粘膜損傷的嚴重程度有關(guān)，可能是一種新的胃粘膜保護分子；成功制備了GDDR單克隆抗體。
　　【結(jié)論】
　　本研究說明GDDR可能是胃癌中一種新的候選抑癌基因，在腫瘤基因診斷和治療中具有應用前景；GDD