“黃芪-葛根”藥對(duì)對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷的保護(hù).pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、背景:
  近年來我國(guó)飲酒人群的數(shù)量以及酒精消費(fèi)數(shù)量逐年增加,因飲酒引起的消化系統(tǒng)疾病,已經(jīng)成為一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問題與醫(yī)學(xué)問題。飲酒導(dǎo)致的消化系統(tǒng)疾病多為胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、酒精性肝病、肝硬化等;長(zhǎng)期飲酒還可以誘發(fā)腸上皮化生,腸上皮化生是胃粘膜病變向胃癌過度的一個(gè)階段。
  藥對(duì)研究是中藥復(fù)方研究的重要組成部分,也是研究中藥復(fù)方的一個(gè)突破口。黃芪—葛根藥對(duì)首見于清代醫(yī)書《證治匯補(bǔ)》中所記載的黃芪葛根湯,原方中黃芪與葛根

2、的配伍比例為2∶1,歷代多位醫(yī)家認(rèn)為此方具有解酒毒的作用。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),黃芪苷類可以減輕乙醇對(duì)胃粘膜的損傷。黃芪甲苷與黃芪總苷可以促進(jìn)已損傷的胃上皮細(xì)胞GES-1的修復(fù),其作用機(jī)制與黃芪甲苷、黃芪總苷參與細(xì)胞凋亡等相關(guān)通路有密切聯(lián)系。因此本研究以黃芪—葛根藥對(duì)為切入點(diǎn),探討其保護(hù)胃粘膜損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)與相關(guān)機(jī)制。
  目的:
  優(yōu)選黃芪—葛根藥對(duì)保護(hù)胃粘膜損傷的最佳水煎工藝;建立黃芪—葛根藥對(duì)不同配伍比例的高效液相指

3、紋圖譜,通過譜效關(guān)系的研究,明確黃芪—葛根藥對(duì)中的異黃酮類成分對(duì)保護(hù)胃粘膜損傷的貢獻(xiàn)大小;初步探討黃芪—葛根藥對(duì)保護(hù)乙醇誘導(dǎo)胃粘膜損傷的機(jī)制。
  方法:
  1.正交試驗(yàn)結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芪—葛根藥對(duì)抗乙醇誘導(dǎo)胃粘膜損傷最佳水煎工藝。以黃芪—葛根藥對(duì)水煎液中葛根素的化學(xué)含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo),以乙醇對(duì)小鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)作為藥效指標(biāo),設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),對(duì)藥對(duì)煎藥的時(shí)間、煎藥的次數(shù)、煎藥水量3個(gè)因素,分別分為3個(gè)水平進(jìn)行綜合考察,優(yōu)選

4、出黃芪—葛根藥對(duì)(2∶1配伍)保護(hù)胃粘膜的最佳水煎工藝。
  2.高效液相色譜法建立黃芪—葛根藥對(duì)不同配伍比例(3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3)的指紋圖譜;將不同配伍的黃芪—葛根藥對(duì)指紋圖譜共有峰相對(duì)峰面積與小鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)分析,通過關(guān)聯(lián)度大小,明確藥對(duì)中已鑒別的異黃酮類化學(xué)成分對(duì)胃粘膜保護(hù)作用的貢獻(xiàn)度。
  3.觀察黃芪—葛根藥對(duì)對(duì)乙醇誘導(dǎo)大鼠胃粘膜損傷的保護(hù)。測(cè)量并計(jì)算肉眼下胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)與光鏡下病

5、理切片胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)。HE染色病理切片觀察黃芪—葛根藥對(duì)對(duì)不同實(shí)驗(yàn)組大鼠胃粘膜損傷形態(tài)學(xué)的影響。
  4.觀察藥對(duì)對(duì)凋亡信號(hào)通路關(guān)鍵基因與蛋白的影響。通過Real time PCR、免疫組織化學(xué)、Western-blot法檢測(cè)藥對(duì)對(duì)凋亡信號(hào)通路Bcl-2/Bax/Caspase-3基因與蛋白表達(dá)的影響。
  結(jié)果:
  1.黃芪—葛根藥對(duì)(2∶1配伍)按照煎煮3次,每次30 min,10倍水量的水煎工藝所煎煮的藥液中葛

6、根素含量(15.90±0.04mg/mL)高于其它中藥組,其小鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)(14.8±11.8)低于其它給藥組。黃芪—葛根藥對(duì)煎煮30min,煎煮3次,加10倍水作為本研究的最佳水煎工藝。
  2.黃芪—葛根藥對(duì)不同配伍比例(3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3)對(duì)乙醇誘導(dǎo)小鼠的胃粘膜損傷均有保護(hù)作用,均可以降低小鼠胃粘膜的損傷分?jǐn)?shù),其中3∶1配伍組胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)低于其它配伍組,其保護(hù)胃粘膜損傷的效果優(yōu)于其它配伍組。與已知對(duì)

7、照品比較,鑒別出黃芪—葛根藥對(duì)中的8個(gè)異黃酮類化學(xué)成分分別是:染料木素、染料木苷、葛根素、毛蕊異黃酮、大豆苷、大豆苷元、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花素。通過將HPLC指紋圖譜獲得的藥對(duì)共有峰峰面積與小鼠胃粘膜損傷分?jǐn)?shù)相關(guān)聯(lián),得到8種異黃酮類化學(xué)成分對(duì)胃粘膜保護(hù)作用的貢獻(xiàn)度依次為:染料木素>葛根素>大豆苷元>大豆苷>芒柄花素>毛蕊異黃酮>染料木苷>毛蕊異黃酮葡萄糖苷。
  3.肉眼觀察發(fā)現(xiàn),正常組大鼠胃組織粘膜表面呈現(xiàn)淡粉色,粘膜表面

8、連續(xù)、光滑、無破損、無充血;模型組大鼠粘膜色鮮紅、呈現(xiàn)出線狀或斑點(diǎn)狀出血;與模型組相比較,各預(yù)防給藥組粘膜損傷較輕,局部?jī)H有少數(shù)點(diǎn)狀出血。HE染色病理切片結(jié)果顯示,正常組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞有很好的連續(xù)性、細(xì)胞排列緊密有序、固有層腺體排列整齊;與正常組相比較,模型組大鼠粘膜組織遭到破壞,上皮細(xì)胞脫落、壞死,腺體排列紊亂,粘膜下層水腫,腺體擴(kuò)張,有紅細(xì)胞外滲;陽性藥(西米替?。┙M與藥對(duì)高劑量藥組可見少量上皮細(xì)胞脫落,損傷情況均輕于模型組,藥

9、對(duì)中劑量組與藥對(duì)低劑組可見上皮細(xì)胞局部脫落,粘膜損傷稍重于西藥組與藥對(duì)高劑量組,但均輕于模型組。
  4.與模型組相比,黃芪—葛根藥對(duì)可以上調(diào)Bcl-2基因的mRNA的表達(dá),下調(diào)Bax與Caspase-3基因的mRNA的表達(dá);免疫組化與Western-blot結(jié)果顯示,與模型組相比,黃芪—葛根藥對(duì)可以上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平,下調(diào)促凋亡蛋白Bax與Caspase-3的表達(dá),其中西藥組與黃芪—葛根藥對(duì)高劑組的效果優(yōu)于藥對(duì)中

10、劑組與藥對(duì)低劑組。
  結(jié)論:
  1.正交試驗(yàn)優(yōu)選的黃芪—葛根藥對(duì)最佳水煎工藝為:煎煮3次、每次30min,10倍水量。
  2.黃芪—葛根藥對(duì)對(duì)乙醇誘導(dǎo)的胃粘膜損傷具有保護(hù)作用,其中3∶1配伍組保護(hù)胃粘膜損傷的效果優(yōu)于其它配伍組;藥對(duì)中已鑒別的8種異黃酮化合物中染料木素保護(hù)胃粘膜損傷的貢獻(xiàn)度大于葛根素與其它異黃酮類化合物。
  3.黃芪—葛根藥對(duì)可以減輕乙醇導(dǎo)致的胃粘膜出血、水腫、糜爛等病理損傷;其作用機(jī)制可

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