NEDD9在膀胱癌轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、背景:
　　膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其臨床特點是腫瘤多發(fā)和復發(fā)率高。目前，已在世界范圍的認可的治療方法是根治性手術為主的綜合療法，但并未給患者生存期帶來突破性改善。膀胱癌的發(fā)病機制尚未完全闡明，目前引發(fā)膀胱癌死亡的主要原因是演進期膀胱癌的轉(zhuǎn)移和復發(fā)，認為與多基因、多層次的細胞信號網(wǎng)絡紊亂有關，而膀胱癌轉(zhuǎn)移的分子機理尚不完全明了。因此，尋找能夠作為膀胱癌早期診斷的新治療靶點的生物分子和標記物，明確膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及

2、浸潤轉(zhuǎn)移的分子機制具有重要的意義。
　　NEDD9(Neural precursor cell Expressed Developmentally Down-regulated9)是一種細胞骨架蛋白，在多種常見惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達狀態(tài)，并已證實其是一種與腫瘤發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移相關的分子，在腫瘤的發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。然而對NEDD9在膀胱癌中所發(fā)揮作用的研究在國內(nèi)外鮮有文獻報道。NEDD9和膀胱癌的發(fā)生發(fā)展是否有相關性是本研究

3、需要探討的核心。
　　目的:
　　檢測膀胱癌組織和正常正常膀胱組織中NEDD9 mRNA及蛋白的表達，并分析其與膀胱癌浸潤轉(zhuǎn)移的關系。上調(diào)或下調(diào)膀胱癌細胞株中NEDD9的表達，觀察NEDD9表達水平改變對膀胱癌細胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。
　　方法:
　　1. NEDD9在膀胱癌組織及癌旁組織中的表達差別及意義
　　收集24對配對的組織標本，采用熒光定量RT-PCR、免疫組化SP法及Westernb

4、lot檢測各組組織中NEDD9 mRNA及蛋白的相對表達量;并統(tǒng)計分析NEDD9在膀胱癌及癌旁膀胱黏膜組織中的表達差異，以及NEDD9表達量與膀胱癌分化程度的相關性。
　　2. NEDD9對膀胱癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響
　　采用熒光定量RT-PCR及western blot法分析膀胱癌細胞株EJ，T24，5637，RT-4中NEDD9本底表達水平，利用NEDD9過表達腺病毒及NEDD9 siRNA，上調(diào)或下調(diào)膀胱癌

5、細胞株中NEDD9的表達，運用MTT法，流式細胞技術，單層細胞劃痕實驗，transwell小室遷移及侵襲實驗，觀察NEDD9表達水平改變對膀胱癌細胞生長、凋亡、轉(zhuǎn)移及侵襲力的影響。
　　結(jié)果:
　　1. NEDD9在膀胱癌組織中及癌旁組織中的表達差別及意義
　　在收集的24例膀胱癌組織標本中，免疫組化結(jié)果顯示與正常膀胱組織相比，高、低分化膀胱癌組織中NEDD9的染色均升高，低分化膀胱癌組織中NEDD9的升高尤為明顯;熒

6、光定量RT-PCR結(jié)果顯示與癌旁組織相比，低分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達水平顯著升高，而高分化膀胱癌組織中NEDD9 mRNA表達水平無顯著差異;Western Blot結(jié)果顯示與癌旁組織相比，低分化膀胱癌組織中NEDD9蛋白表達量也表現(xiàn)為明顯升高。
　　2. NEDD9膀胱癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響
　　熒光定量RT-PCR及western blot檢測顯示NEDD9在膀胱癌細胞株EJ，5637，T24

7、，RT-4均有表達，其中EJ細胞中表達水平最低，而5637細胞中表達水平最高。
　　敲低5637細胞中NEDD9后培養(yǎng)84h后，可觀察到其生長與對照組相比收到顯著抑制，而流式細胞凋亡檢測顯示5637-NEDD9 siRNA組的凋亡比例比5637-NC組提高近10％，提示敲低NEDD9可抑制5637細胞增殖并誘導凋亡。
　　NEDD9過表達促進EJ細胞劃痕愈合，可以提高transwell小室遷移及侵襲實驗中的穿膜細胞數(shù)，反之5

8、637-NEDD9 siRNA組的劃痕愈合能力減弱，且穿過基底膜的細胞數(shù)量顯著下降。
　　結(jié)論:
　　1. NEDD9蛋白及其mRNA在膀胱癌組織中呈高表達，其表達量與膀胱癌的分化程度密切相關。提示NEDD9有望成為膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的預測指標，且可望成為膀胱癌靶向治療的有效靶點。
　　2. NEDD9 siRNA能顯著下調(diào)膀胱癌5637細胞中NEDD9的表達，抑制細胞增值，并誘導細胞凋亡，降低細胞的遷移及侵襲力。NEDD