類固醇受體共激活因子-3在膀胱癌中的表達(dá)及對(duì)膀胱癌增殖作用的影響.pdf

1、目的：研究類固醇受體共激活因子-3（Steroid Receptor Coactivator-3，SRC-3）在膀胱癌中的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌增殖作用的影響
　　方法：實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR)和western blot檢測(cè)SRC-3 mRNA和蛋白在28例膀胱尿路上皮癌標(biāo)本中的表達(dá)情況。構(gòu)建 SRC-3腺病毒過表達(dá)載體

2、以及 SRC-3小干擾RNA(small interference RNA, siRNA)轉(zhuǎn)染膀胱癌EJ細(xì)胞和T24細(xì)胞。qRT-PCR檢測(cè)SRC-3 mRNA過表達(dá)和沉默效果，Western blot分析過表達(dá)和沉默SRC-3后SRC-3蛋白表達(dá)水平。BrdU增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)RC-3以及沉默SRC-3后，對(duì)膀胱癌EJ細(xì)胞和T24細(xì)胞增殖活性的影響。為了研究SRC-3的作用機(jī)制，在過表達(dá)和沉默SRC-3后，qRT-PCR和wester

3、n blot檢測(cè)CXC趨化因子受體-4（C-X-C chemokine receptor type-4，CXCR4）mRNA和蛋白表達(dá)情況。同時(shí)過表達(dá)SRC-3細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染CXCR4 siRNA沉默CXCR4基因，檢測(cè)干擾CXCR4后對(duì)過表達(dá)SRC-3的膀胱癌細(xì)胞增殖活性的影響。
　　結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blot結(jié)果顯示SRC-3 mRNA和蛋白在71.4％（20/28）的膀胱癌標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)，同癌旁正常組織

4、相比，表達(dá)倍數(shù)變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（SRC-3 mRNA，Normal vs Bladder cancer：7.1±2.3 vs1.6±1.3，P<0.01）。過表達(dá)SRC-3后，Brdu增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果示膀胱癌EJ細(xì)胞和T24細(xì)胞增殖活性顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（EJ，EV vs SRC-3：0.5±0.4 vs0.8±0.6，P<0.05；T24，EV vs SRC-3：0.6±0.2，0.8±1.0，P<0.01）；而siRNA干擾

5、SRC-3表達(dá)后，EJ細(xì)胞和T24細(xì)胞增殖活性顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（EJ，control vs siRNA：0.7±0.1 vs0.44±0.1，P<0.01；T24，control vs siRNA：0.78±0.2 vs0.43±0.06，P<0.01）。過表達(dá)SRC-3的膀胱癌細(xì)胞中，CXCR4 mRNA（P<0.05）和蛋白表達(dá)上調(diào)；沉默SRC-3后，CXCR4 mRNA（EV vs SRC-3：1.0±0.1 vs2.