家蠶蛋白酪氨酸磷酸酶BmPTP鑒定與免疫功能研究.pdf

1、蛋白酪氨酸磷酸酶(BmPTP)是細胞信號轉導以及細胞周期的重要調控分子，同時在細胞生長、繁殖、分化、轉化、免疫等諸多領域也發(fā)揮著重要作用。關于該酶的研究主要集中在哺乳動物中，昆蟲中蛋白酪氨酸磷酸酶的研究還很少，尤其缺乏免疫功能方面的研究。本文通過生物信息學的方法對家蠶中的蛋白酪氨酸磷酸酶進行了鑒定和分類，同時確定了對BmPTP免疫功能的研究。研究通過感染病菌后檢測BmPTP的表達變化，并通過過表達以及干涉BmPTP的方式檢測該基因在Bm

2、E細胞中的免疫功能變化，然后對家蠶個體進行了干涉實驗，以對細胞實驗的結果進行驗證。本實驗主要的研究結果如下:
　　1.家蠶蛋白酪氨酸磷酸酶的鑒定與分類
　　從日本家蠶數(shù)據(jù)庫（http://sgp.dna.affrc.go.jp/KAI KObase/）與本實驗室家蠶數(shù)據(jù)庫（http://www.silkdb.org/silkdb/）中篩選到了46個含有蛋白酪氨酸磷酸酶催化結構域的序列，最終獲得了41個基因的完整序列。對獲得的

3、41個完整基因進行了進化樹比對，并按照催化結構域結構的不同對它們進行了分類。同時確定了以BmPTP(BMgn016959)為免疫功能研究對象。并對其進行了時期表達譜分析和組織表達譜分析。
　　2.BmPTP功能研究
　　首先，檢測了BmPTP在細胞及個體感染黑胸敗血芽孢桿菌（Bacillusbombyseptieus），沙雷氏菌（Serratia marcescens）和家蠶BmNPV（Bombyx morinucleopo

4、lyhedrovirus）病毒后的表達變化，發(fā)現(xiàn)了在家蠶在感染BmNPV病毒后，BmPTP在細胞及個體中48 h后表達量有明顯的上升;在細菌感染后的某些組織中BmPTP的表達量也有明顯的變化。為了對BmPTP在免疫功能上的作用進行進一步探究，構建了BmPTP真核及原核表達載體，并通過western blot和考馬斯亮藍染色的方法對表達進行了檢測。然后構建了蛋白酪氨酸磷酸酶活性檢測系統(tǒng)，并檢測到了BmPTP的活性。同時還合成了BmPTP的