CTNNAL1對(duì)肺應(yīng)激損傷上皮修復(fù)和間質(zhì)修復(fù)的平衡點(diǎn)調(diào)控.pdf

1、肺和氣道作為內(nèi)外環(huán)境相互作用的第一道界面，經(jīng)常遭受來自外環(huán)境的應(yīng)激刺激或損傷，構(gòu)成許多肺部疾病甚至全身性疾病的啟動(dòng)基礎(chǔ)。氣道上皮是肺臟應(yīng)激的首道防線，受損后的氣道上皮立即啟動(dòng)修復(fù)過程，包括可逆的上皮修復(fù)和不可逆的間質(zhì)修復(fù)。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指細(xì)胞由上皮表型向間質(zhì)表型轉(zhuǎn)變的過程。EMT的發(fā)生是纖維化中肌成纖維細(xì)胞的重要來源，是介于正常組織損傷后上皮修復(fù)和間質(zhì)修復(fù)之

2、間一個(gè)極重要的生物學(xué)過程。受損的肺組織如何選擇不同類型的修復(fù)機(jī)制，可能取決于其表達(dá)的具有感知周邊環(huán)境和自身狀態(tài)功能的粘附分子譜。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)連環(huán)素(catenin)家族成員CTNNAL1(catenin alpha-like1)在哮喘病人氣道粘膜中表達(dá)下調(diào);體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CTNNAL1參與氣道應(yīng)激反應(yīng)，促進(jìn)人支氣管上皮細(xì)胞(human bronchial epithelial cells，HBECs)增殖和損傷修復(fù)，提示CTNNA

3、L1不僅僅是一種結(jié)構(gòu)性粘附分子，還能響應(yīng)應(yīng)激，對(duì)氣道上皮細(xì)胞的應(yīng)激和修復(fù)功能應(yīng)該具有保護(hù)性的作用。因此，本研究假設(shè)在肺臟應(yīng)激損傷與修復(fù)的過程中，CTNNAL1在上皮細(xì)胞中發(fā)揮積極影響，對(duì)肺損傷后上皮修復(fù)與間質(zhì)修復(fù)起平衡調(diào)控作用。
　　目的:
　　本課題擬用臭氧作為應(yīng)激刺激，構(gòu)建人支氣管上皮細(xì)胞EMT模型，并觀察CTNNAL1對(duì)氣道上皮細(xì)胞EMT的影響，探討CTNNAL1在氣道上皮損傷和修復(fù)過程中的作用。
　　方法:

4、r>　　(1)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞系(HBECs)，用臭氧進(jìn)行應(yīng)激刺激，構(gòu)建EMT模型，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR，Western blot法和細(xì)胞免疫組化法鑒定上皮和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)。
　　(2)體外培養(yǎng)CTNNAL1高表達(dá)和沉默的HBE穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)臭氧應(yīng)激下CTNNAL1不同表達(dá)水平HBECs上皮和間質(zhì)標(biāo)記物的表達(dá)，觀察CTNNAL1對(duì)EMT的影響。
　　(3)EL

5、ISA法檢測(cè)臭氧應(yīng)激下各組HBECs中TGF-β1的分泌情況。
　　結(jié)果:
　　(1)臭氧應(yīng)激可使HBECs上皮標(biāo)記物表達(dá)降低，間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)增高，符合EMT表型。
　　(2)CTNNAL1高表達(dá)促進(jìn)臭氧應(yīng)激后HBECs上皮標(biāo)記物表達(dá)，抑制間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)，抑制EMT發(fā)生;CTNNAL1沉默后作用相反。
　　(3)臭氧應(yīng)激后，HBECs分泌的TGF-β1表達(dá)增多;CTNNAL1高表達(dá)下調(diào)HBECs分泌的TGF-β1