mir-92b與miR-222在兒童腦膠質(zhì)瘤中表達及機制研究.pdf

1、1目的
　　1.1研究兒童膠質(zhì)瘤中miR-92b、miR-222的表達及對膠質(zhì)瘤細胞增殖、凋亡的影響。
　　1.2利用RNA干擾敲除miR-92b和miR-222靶基因，研究miR-92b、miR-222通過何種信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞的活性。
　　1.3構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，應(yīng)用RNA干擾敲除膠質(zhì)瘤中miR-222的表達，探討RNA干擾抑制膠質(zhì)瘤生長的療效，并探索其機制。
　　2方法
　　2.1分析膠質(zhì)瘤m

2、icroRNA芯片表達譜數(shù)據(jù)，篩選有研究價值的microRNA.并利用realtimePCR驗證芯片結(jié)果。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人工合成microRNA(mimics)及其抑制劑(inhibitor)，調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤細胞中miR-92b和miR-222的表達，分析其對膠質(zhì)瘤細胞增殖、克隆形成、凋亡的影響。
　　2.2生物信息學(xué)分析預(yù)測miR-92b和miR-222的靶基因，并利用雙熒光素酶報告、Westernblot驗證靶基因。利用RNA

3、干擾技術(shù)驗證miR-92b和miR-222通過何種信號通路調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞活性。
　　2.3、構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，利用RNA干擾抑制miR-222表達，觀察腫瘤生長速度、體積變化，進一步驗證敲低miR-222對膠質(zhì)瘤的抑制作用。
　　3結(jié)果
　　3.1miR-92b、miR-222在兒童膠質(zhì)瘤和膠質(zhì)瘤細胞株中均呈高表達。膠質(zhì)瘤細胞中miR-92b、miR-222表達改變，可對膠質(zhì)瘤細胞增殖、克隆形成、凋亡產(chǎn)生影響。

4、r>　　3.2DKK家族蛋白中的DKK3和DKK2分別是miR-92b和miR-222的靶基因。miR-92b、miR-222可通過各自靶基因影響Wnt信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達。
　　3.3RNA干擾敲除miR-222表達，對裸鼠皮下成瘤有抑制作用。
　　4結(jié)論
　　4.1膠質(zhì)瘤中miR-92b、miR-222呈高表達，起到致癌基因的作用。抑制miR-92b、miR-222表達，能顯著抑制腫瘤細胞增殖、克隆形成，促進凋