IL-13誘導(dǎo)白血病細胞系Dami和HEL細胞STAT6磷酸化.pdf

1、研究重組人白細胞介素13(Recombinant human interleukin 13，rhIL-13)誘導(dǎo)白血病細胞系Dami和HEL(human erythrol eukemia，人類紅白血病)STAT6(Signal transducers and activators of transcription，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子)磷酸化，部分闡明IL-13的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 方法 1.細胞培養(yǎng)：Dami、HEL細胞

2、用含lO％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，37℃，5％CO<,2>。取生長狀態(tài)良好的細胞，調(diào)整細胞密度為8×10<'8>～1×lO<'9>／L，在細胞因子誘導(dǎo)前先經(jīng)無血清培養(yǎng)20h。 2.總RNA提?。阂詒hIL-13(100μg／L)分別誘導(dǎo)Dami、HEL細胞不同時間，提取各組總RNA，通過RNA電泳判斷其是否符合實驗要求。 3.RT-PCR方法：檢測rhIL-13作用Dami、HEL細胞0、4h、12h，I

3、L-4受體α(IL-4Rα)的mRNA表達。 4.Western blot方法：取生長狀態(tài)良好的Dami、HEL細胞，調(diào)整細胞密度為8×10<'8>～1×10<'9>／L，經(jīng)20h的無血清培養(yǎng)后，用rhIL-13(100μg／L)分別作用0、lh、2h、4h、8h，RIPA buffer裂解細胞提取蛋白質(zhì)，用Western blot方法檢測總STAT6蛋白以及p-STAT6(phosphorylated STAT6，磷酸化STA

4、T6)蛋白的表達。 結(jié)果 1.Dami細胞表達STAT6蛋白，rhIL-13誘導(dǎo)2h， STAT6蛋白磷酸化，4h去磷酸化。 2．HEL細胞表達STAT6蛋白，rhIL-13誘導(dǎo)1h，STAT6蛋白磷酸化，4h去磷酸化。 3．Dami細胞表達IL-4R α mRNA。 4．HEL細胞表達IL-4R α mRNA。 結(jié)論 1．白血病細胞系HEL和Dami表達STAT6蛋白。