人白血病細(xì)胞系KG-1a中腫瘤干細(xì)胞樣亞群細(xì)胞的鑒定與富集.pdf

1、目的：探討人白血病細(xì)胞系KG-1a中是否存在具有腫瘤干細(xì)胞樣生物學(xué)特性的亞群細(xì)胞。 方法：瑞氏染色和吖啶橙染色分別觀察白血病細(xì)胞系KG-1a細(xì)胞形態(tài)和RNA含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布；免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)檢測KG-1a細(xì)胞CD34抗原的表達(dá)；流式細(xì)胞術(shù)檢測CD34+CD38-亞群細(xì)胞；煙酸己可堿Hoechst33342染色后用熒光顯微鏡觀察KG-1a細(xì)胞中側(cè)群（side population，SP）樣細(xì)胞所占比例。

2、 結(jié)果：白血病細(xì)胞系KG-1a細(xì)胞形態(tài)原始核仁易見；部分細(xì)胞RNA含量低，細(xì)胞處于G0/G1期的比例占15.5％。絕大多數(shù)細(xì)胞的胞漿和胞膜皆表達(dá)CD34抗原，KG-1a中CD34+細(xì)胞占96.3％，CD34+CD38-亞群細(xì)胞占7.02％；SP樣細(xì)胞比例為7.60％。 結(jié)論：人白血病細(xì)胞系KG-1a中存在具有腫瘤干細(xì)胞樣生物學(xué)特性的亞群細(xì)胞。 目的：探討利用細(xì)胞周期特異性藥物5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5

3、-FU）從人白血病細(xì)胞系KG-1a中富集腫瘤干細(xì)胞樣亞群細(xì)胞。 方法：體外藥物敏感試驗(yàn)確定5-FU的最佳作用濃度和作用時間；KG-1a細(xì)胞經(jīng)5-FU藥物處理后，流式細(xì)胞術(shù)檢測存活細(xì)胞群中CD34+CD38-亞群細(xì)胞比例；吖啶橙染色觀察細(xì)胞內(nèi)的核酸組成；RT-PCR半定量檢測細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2（ATP-binding cassette superfamily G member2，ABCG2）mRNA的表達(dá)；

4、煙酸己可堿Hoechst33342染色后用熒光顯微鏡觀察KG-1a細(xì)胞中側(cè)群（side population，SP）樣細(xì)胞所占比例；半固體培養(yǎng)觀察細(xì)胞的集落形成能力。 結(jié)果：50μg/ml5-FU作用KG-1a細(xì)胞4d后，CD34+CD38-亞群細(xì)胞比例提高10倍以上；吖啶橙染色可見大部分細(xì)胞核酸以發(fā)出綠色熒光的DNA為主，RNA含量低；此類細(xì)胞高表達(dá)ABCG2 mRNA水平；SP樣細(xì)胞在存活細(xì)胞亞群中得到顯著富集；而藥物處理后