異氟醚后處理的腦保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的：通過觀察異氟醚后處理對SD大鼠腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞凋亡及凋亡蛋白Caspase-3表達的影響，探討異氟醚后處理的腦保護效應、后處理時間窗以及JNK信號通道在異氟醚后處理誘導腦保護中的作用。
　　方法：健康成年SD大鼠40只，隨機分為5組（n=8），A組：正常對照組，僅手術操作，不進行缺血再灌注；B組：缺血再灌注損傷組，電凝雙側(cè)椎動脈，24小時后分離雙側(cè)頸總動脈并夾閉15分鐘后開放；C組：異氟醚后處理Ⅰ組，再灌注

2、即刻吸入異氟醚；D組：異氟醚后處理Ⅱ組，再灌注10min吸入異氟醚；E組：異氟醚后處理Ⅲ組，再灌注20min吸入異氟醚。異氟醚后處理吸入濃度為1.5％，各處理組分別于再灌注時間點吸入異氟醚30min。再灌注72h后取腦組織常規(guī)HE染色觀察大鼠海馬神經(jīng)中神經(jīng)系統(tǒng)損傷，同時應用免疫組織化學染色檢測Caspase-3在SD大鼠海馬神經(jīng)細胞中表達，TUNEL法檢測大鼠海馬中神經(jīng)細胞的病理學變化，免疫印跡法（Western blotting）檢測

3、大鼠海馬組織p-JNK蛋白表達量。
　　結(jié)果：1.HE染色：A組腦組織切片未見明顯海馬組織損傷； B組海馬組織損傷明顯,顯示顆粒層細胞明顯水腫和空泡變性,神經(jīng)細胞壞死，血管明顯充血并出血；與B組相比較，D、C組損傷的程度依次減輕(P<0.05)，E組損傷程度與B組相似(P>0.05)。
　　2.Caspase-3免疫組化檢測：A組未檢測到明顯的Caspase-3陽性神經(jīng)元表達；B組Caspase-3的陽性表達明顯增高;與B組

4、相比較，D、C組Caspase-3的陽性表達依次降低(P<0.05)，E組陽性表達與B組相似（P>0.05）。
　　3.TUNEL法細胞凋亡檢測：A組未見明顯的神經(jīng)細胞凋亡，B組神經(jīng)細胞凋亡陽性表達顯著增高；與 B組相比較，D、C組細胞凋亡陽性表達率依次降低(P<0.05)，E組的細胞凋亡陽性表達率與B組相似(P>0.05)。
　　4．免疫印跡法p-JNK蛋白表達檢測：與A組比較，B組p-JNK蛋白陽性表達量顯著增高；與B組

5、相比較，C、D組p-JNK蛋白陽性表達量明顯降低（P<0.05）,C、D組p-JNK蛋白表達量無明顯差異（P>0.05），E組p-JNK蛋白陽性表達量與B組無明顯差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：1.異氟醚后處理通過抑制Caspase-3的表達，抑制神經(jīng)細胞凋亡，減輕腦缺血再灌注損傷，產(chǎn)生腦保護效應。
　　2.異氟醚后處理具有一定的時效性，腦損傷后后處理啟用越早,其腦保護效應越好。
　　3.在異氟醚后處理減輕腦缺血再灌