異氟醚后處理通過抑制AMPA受體過度活化對缺血缺氧性腦損傷新生大鼠的腦保護作用.pdf

1、本文從以下幾方面進行論述：
　　第一部分
　　目的：異氟醚是臨床上廣為應用的吸入麻醉藥，本課題組前期研究已經證實異氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷具有保護作用，本實驗旨在探討異氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護作用是否與AMPA受體有關。
　　方法：7d齡新生SD大鼠100只（體重12～16g），隨機分為五組，分別為假手術組（Sham組）、缺血缺氧組（HI組）、1.5％異氟醚后處理組（Iso組）、1.5％異

2、氟醚后處理+激動劑組（Iso+AMPA組）、1.5％異氟醚后處理+抑制劑組(Iso+CNQX組)，每組20只。除了Sham組只找到左側頸總動脈不結扎，不進行低氧處理，其余各組均雙重結扎左側頸總動脈，放回母鼠身邊喂哺2h，后以8％O2+92％N2的濕化混合氣體以2L/min的流量低氧處理2h，制備HIBD模型。模型制備成功后，Iso組、Iso+AMPA組、Iso+CNQX組均即刻吸入1.5％異氟醚30min，以30％O2+70％N2濕化混

3、合氣體輸送，流量2L/min，Sham組、HI組只吸入流量2L/min的30％O2+70％N2濕化混合氣體30min。大鼠蘇醒后，30min內完成側腦室注射: Sham組、HI組、Iso組左側腦室注射生理鹽水，Iso+AMPA組左側腦室注射AMPA，Iso+CNQX組左側腦室注射CNQX。手術后7d，測定大鼠體質量，測定左、右大腦半球質量并計算質量比，切片HE染色計數(shù)左、右側大腦海馬CA1區(qū)正常神經元數(shù)量并計算密度比。
　　結果：

4、各組大鼠體質量無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，與Sham組比較，各組大鼠左/右大腦半球質量比均下降(P＜0.05)，海馬CA1區(qū)左/右側正常神經元密度比下降(P＜0.05)。與HI組比較，Iso組、Iso+CNQX組大鼠左/右大腦半球質量比以及左/右側海馬CA1區(qū)正常神經元密度比有明顯升高(P＜0.05)，而Iso+AMPA組大鼠左/右大腦半球質量比及左右側海馬CA1區(qū)正常神經元密度比卻無明顯變化(P＞0.05)。相比Iso組，Iso+C

5、NQX組大鼠左/右大腦半球質量比及左/右側海馬CA1區(qū)正常神經元密度比卻無明顯變化(P＞0.05)，而Iso+AMPA組大鼠左/右大腦半球質量比及左/右側海馬CA1區(qū)正常神經元密度比明顯降低(P＜0.05)。
　　結論：異氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷有保護作用，并且其保護可能與抑制AMPA受體過度活化有關。
　　第二部分
　　目的：本實驗第一部分研究顯示異氟醚后處理可能是通過抑制AMPA受體過度活化而對新生大鼠

6、缺血缺氧性腦損傷起到保護作用，但AMPA受體是由GluR（1-4）亞單位組成的異聚體，GluR2作為AMPA受體的關鍵亞基，對Ca2+的通透性調節(jié)及神經細胞損傷起到重要作用，本實驗旨在探討異氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的保護作用是否是穩(wěn)定AMPA受體GluR2在突觸后膜表達來實現(xiàn)。
　　方法：7d齡新生SD大鼠75只，體重12～16g，隨機分為三組，分別為假手術組（Sham組）、缺血缺氧組（HI組）、1.5％異氟醚后處理組

7、（Iso組），每組25只。Sham組只找到左側頸總動脈不結扎，不進行低氧處理。HI組和Iso組制作HIBD模型:兩次結扎左側頸總動脈，返回母鼠身邊恢復2h，后置于37℃水浴環(huán)境的自制缺氧箱內，以2L/min的流量持續(xù)輸入8％O2+92％N2的濕化混合氣體，低氧處理2h。建立模型后，Iso組即刻以濕化30％O2+70％N2的混合氣體輸送1.5％異氟醚，處理30min，流量為2L/min，sham組、HI組只吸入30％O2+70％N2的濕化

8、混合氣體。術后分別于1d、7d、14d、28d各組取5只大鼠，取損傷側海馬組織，western-blot測定HI組各時間點AMPA受體GluR2蛋白的表達，選取GluR2表達下降最明顯的時間點，各組取5只大鼠做western-blot及免疫熒光測定各組該時間點GluR2的表達情況。
　　結果：與Sham組比較，HI組和Iso組損傷側海馬組織細胞膜AMPA受體GluR2表達降低(P＜0.05)，熒光光密度下降;但與HI組比較，Iso