結(jié)扎冠狀動脈對大鼠心肌組織NK-,1-受體、β-,1-腎上腺素能受體表達的影響及P物質(zhì)、降鈣素基因相關(guān)肽mRNA定位的研究.pdf

1、研究目的：觀察P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)mRNA在大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)、脊髓、心臟和肺臟的分布：大鼠冠狀動脈結(jié)扎后不同時點NK1受體和β1受體在心臟的表達變化，以及硬膜外藥物干預效應(yīng)。探討神經(jīng)肽在神經(jīng)源性反應(yīng)和器官損傷/保護中的作用。 研究背景：已有的相關(guān)研究表明，SP、CGRP參與機體對心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。在發(fā)生急性心肌缺血時，交感一腎上腺素能活性明顯增高，且心肌組織內(nèi)上述活性物質(zhì)的含量均有所增加，提示SP

2、、CGRP參與并影響急性心肌缺血的病理變化過程，目前其分子作用機制還不明確。 研究內(nèi)容及方法： 第一部分：急性心肌缺血大鼠PPT-A mRNA、CGRP mRNA的表達 以及與內(nèi)臟神經(jīng)分布的關(guān)系實驗選用雄性SD大鼠隨機分為兩組：(1)手術(shù)對照組(Sham group，Sham組)，只開胸暴露心臟，不結(jié)扎冠脈；(2)結(jié)扎冠狀動脈組(Coronary artery occlusion group,CAO組)，單純扎閉

3、冠狀動脈左前降支。每組均為6只動物。采用原位分子雜交技術(shù)觀察結(jié)扎冠脈后3h大鼠DRG、脊髓、心臟和肺臟組織PPT-A mRNA、CGRP mRNA的表達情況；并應(yīng)用銀染法檢測心臟、肺臟、腸道、脾臟神經(jīng)組織的分布。 第二部分：急性心肌缺血大鼠心肌組織NK1受體和β1受體的表達 動物分組同第一部分，每組又分1h、3h和6h三個時點(n=6)。采用免疫組化方法觀察并分析結(jié)扎冠脈后不同時點大鼠心肌組織NK1和β1受體的分布規(guī)律及

4、表達變化；并在受體表達變化最強時點，應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Westem blot)技術(shù)半定量檢測心肌組織該受體的蛋白水平。 第三部分：硬膜外痛覺干預對心肌組織NK1受體和β1受體表達的影響 根據(jù)第二部分實驗結(jié)果，選取CAO后NK1受體和β1受體表達變化最強時點進行藥物干預研究。動物隨機分為四組(n=6)：(1)手術(shù)對照組(Sham組)；(2)結(jié)扎冠狀動脈組(CAO組)；(3)羅哌卡因硬膜外阻滯組(Epidural Ropi

5、vacaine group，E-R組)；(4)嗎啡硬膜外鎮(zhèn)痛組(Epidural Morphine group，E-M組)。后兩組分別在結(jié)扎冠狀動脈前15min經(jīng)胸段硬膜外給予1％羅哌卡因120μg.kg-1或3.75％嗎啡60μg.kg-1。采用免疫組化、Western blot技術(shù)從受體蛋白水平對比分析藥物的硬膜外干預效應(yīng)。 結(jié)果： l、急性心肌缺血大鼠PPT-AmRNA、CGRP mRNA主要分布于DRG小直徑神經(jīng)

6、元和脊髓背角，在心臟、肺臟毛細血管壁和氣道上皮下基底部均有表達；神經(jīng)組織銀染法觀察到內(nèi)臟局部存在豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。 2、CAO 3h和6h組大鼠心臟缺血區(qū)與非缺血區(qū)NK1受體較對照組高表達(P<0.05)。 3、與對照組相比，CAO組大鼠心肌組織β1受體的表達顯著增高(P<0.01)，1小時即達峰值。 4、在羅哌卡因或嗎啡胸段硬膜外干預下，缺血心肌組織NK1受體和β1受體蛋白水平較單純CAO組降低(P<0.05)。

7、 結(jié)論： 1、原位雜交結(jié)果提示：PPT-A mRNA、CGRP mRNA分布規(guī)律相似；急性心肌缺血時心肌細胞、肺實質(zhì)細胞SP、CGRP自身合成較弱；與免疫組化結(jié)果比較，在某些部位SP或CGRP與其mRNA的分布存在不一致性。 2、SP、CGRP及其mRNA在心臟、肺臟中的分布規(guī)律，與銀染實驗觀察到的神經(jīng)分布大致相似。組織器官局部豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及其釋放或合成的神經(jīng)肽，可能參與了局部效應(yīng)因子之間的對話和器官功能的調(diào)節(jié)

8、過程。 3、急性心肌缺血誘發(fā)大鼠心肌組織NK1受體表達上調(diào)，提示：NK1受體參與了急性心肌缺血的神經(jīng)源性反應(yīng)，且受體的改變可能影響和調(diào)節(jié)SP對靶細胞的生物學效應(yīng)。 4、急性心肌缺血誘導大鼠心肌組織β1受體密度迅速顯著上調(diào)，使之對組織局部高濃度的兒茶酚胺反應(yīng)性增強，這種變化參與了缺血心肌損傷的病理生理過程。 5、羅哌卡因或嗎啡胸段硬膜外痛覺干預可在一定程度上抑制急性心肌缺血大鼠心肌組織NK1受體和β1受體的過度表達