靶向沉默ADM基因?qū)σ认侔┘?xì)胞系MiaPaCa-2侵襲和遷移能力的影響.pdf

1、目的：探討通過RNAi技術(shù)靶向沉默ADM基因?qū)θ艘认侔┘?xì)胞系MiaPaCa-2侵襲和遷移能力的影響及其作用機(jī)制，并可能為胰腺癌的臨床治療提供新的思路。
　　 方法：①培養(yǎng)人胰腺癌細(xì)胞系MiaPaCa-2，采用PCR定性檢測(cè)細(xì)胞中ADM mRNA的表達(dá)，Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞中ADM蛋白表達(dá)情況。②設(shè)計(jì)并合成含雙shRNA沉默靶點(diǎn)的質(zhì)粒PgenesilADM及陰性對(duì)照組質(zhì)粒PgenesilHK，鑒定和提純以上質(zhì)粒。③實(shí)

2、驗(yàn)隨機(jī)分為空白對(duì)照組、空質(zhì)粒PgenesilKB組、陰性質(zhì)粒PgenesilHK組及實(shí)驗(yàn)組PgenesilADM組，除空白對(duì)照組外，其余各組分別用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PgenesilKB、PgenesilHK、PgenesilADM至MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后，采用Transwell侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組中MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。④轉(zhuǎn)染48h后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)法檢測(cè)各組細(xì)胞中ADM mRNA的

3、表達(dá)變化;采用Westem Blot檢測(cè)各組細(xì)胞中ADM蛋白表達(dá)情況變化。
　　 結(jié)果：①通過PCR及Western Blot法驗(yàn)證MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞系中有ADMmRNA及ADM蛋白表達(dá)。②PgenesilADM組轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，胰腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯低于空白對(duì)照組、PgenesilKB組及PgenesilHK組(P＜0.05)，空白對(duì)照組、PgenesilKB組、PgenesilHK組三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0

4、.05)。③熒光定量PCR中，PgenesilADM組在MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞中的ADM mRNA的表達(dá)水平低于空白對(duì)照組、PgenesilKB組和PgenesilHK組(P＜0.05)，空白對(duì)照組、PgenesilKB組、PgenesilHK組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。④WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，PgenesilADM組在MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞中的ADM蛋白的表達(dá)水平低于空白對(duì)照組、PgenesilKB組及Pg

5、enesilHK組(P＜0.05)，空白對(duì)照組、PgenesilKB組及PgenesilHK組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：⑴對(duì)于胰腺癌細(xì)胞系MiaPaCa-2，ADM在mRNA和蛋白水平均有表達(dá)。⑵使用重組質(zhì)粒PgenesilADM轉(zhuǎn)染MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞可減弱MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞侵襲和遷移能力，其具體機(jī)制不清。⑶利用RNAi技術(shù)靶向沉默ADM mRNA可造成MiaPaCa-2胰腺癌細(xì)胞中AD