沉默Smurf1對結腸癌細胞系生物學行為的影響.pdf

1、目的：
　　1、構建Smurf1 shRNA真核表達載體。
　　2、分析沉默Smurf1對結腸癌細胞系增殖、遷移、侵襲和EMT轉化的影響。
　　方法：
　　1.Smurf1 shRNA載體的構建用BamHⅠ和HindⅢ將pSilencer4.1質粒和Smurf1同時進行雙酶切后，T4 DNA ligase連接;測序驗證。
　　2 Smurf1 shRNA轉染結腸癌細胞系將脂質體和干擾質粒同時轉染入復蘇好的結

2、腸癌細胞中。
　　3.Smurf1 shRNA穩(wěn)轉細胞系的篩選確定篩選穩(wěn)轉細胞系的G418濃度，并篩選出Smurf1 shRNA穩(wěn)轉細胞系。
　　4.Western blot驗證轉染是否成功檢測Smurf1蛋白表達，確定轉染效果。
　　5.MTT分析shRNA對結腸癌細胞增殖的影響 MTT法檢測結腸癌細胞增殖情況。
　　6.Smurf1 shRNA對結腸癌細胞遷移的影響劃痕實驗檢測結腸癌細胞遷移情況。
　　

3、7 Smurf1 shRNA對結腸癌細胞侵襲的影響Transwell實驗檢測結腸癌細胞侵襲情況。
　　8下調Smurf1對結腸癌細胞EMT轉化的影響Western blot檢測E-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表達水平降低反映結腸癌細胞EMT轉化情況。
　　結果：
　　1、Smurf1 shRNA重組質粒構建成功。
　　2、與對照組相比，轉染有干擾載體的結腸癌細胞系HCT116和SW480隨著時間的

4、增加細胞的增殖速率降低。
　　3、轉染shRNA重組質粒的結腸癌細胞遷移能力下降。
　　4、Transwell實驗證明轉染干擾載體后，結腸癌細胞穿越濾膜的細胞數(shù)目降低。
　　5、結腸癌細胞中的Smurf1表達下調，增加了E-cadherin的表達水平，降低了Vimentin和Twist的表達水平。
　　結論：
　　1、成功的構建了Smurf1干擾載體，該載體能夠抑制Smurf1的表達。
　　2、結腸癌