原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥的臨床與分子發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、目的：隨著血鈣和血清甲狀旁腺激素(PTH)測(cè)定的普及以及臨床醫(yī)生對(duì)原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥認(rèn)識(shí)的深入，該病的發(fā)病率日益增高。但不清楚近十年來(lái)我國(guó)原發(fā)性甲旁亢的現(xiàn)狀如何。甲狀旁腺癌雖然少見(jiàn)，但臨床表現(xiàn)更重，死亡率很高。甲狀旁腺腫瘤的確切發(fā)病機(jī)制并未明了。因此本研究擬通過(guò)分析原發(fā)性甲旁亢的臨床表現(xiàn)和分子生物學(xué)改變，比較良惡性腫瘤間的差異。總結(jié)我國(guó)原發(fā)性甲旁亢的現(xiàn)狀，從遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)角度探討甲狀旁腺腫瘤特別是甲狀旁腺癌可能的發(fā)病機(jī)制。

2、r>　　 方法：分析2000年至2010年間在本科就診的確診為原發(fā)性甲旁亢患者的臨床生化以及病理資料。選取良惡性腫瘤組織標(biāo)本，用MLPA方法對(duì)39個(gè)腫瘤候選基因進(jìn)行基因拷貝數(shù)變異分析，探討基因拷貝數(shù)變異在良惡性甲狀旁腺腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。以甲基化特異性定量PCR方法探討良惡性甲狀旁腺腫瘤中Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因DNA甲基化狀態(tài)。運(yùn)用ChIP技術(shù)探討良惡性甲狀旁腺腫瘤中Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因組蛋白H3K4以及H3K9甲基化狀態(tài)。并用r

3、ealtime PCR以及免疫組化分別驗(yàn)證上述結(jié)果對(duì)靶基因表達(dá)以及蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：就診我科的原發(fā)性甲旁亢患者逐年增加，無(wú)癥狀的原發(fā)性甲旁亢比例從2000年無(wú)此類患者增至2010年的50％。但仍以有癥狀的原發(fā)性甲旁亢為主，占病人總數(shù)的66％。起病年齡51.26±15.59歲。病理類型主要為腺瘤，腺癌的比例占5.96％。血清PTH與血鈣(r=0.585)，腫瘤大小(r=0.441)呈正相關(guān)(P<0.001)，與骨密度以

4、及血紅蛋白濃度負(fù)相關(guān)(r=-0.301至-0.469，P<0.001)，能很好的反映疾病嚴(yán)重程度。86.8％的原發(fā)性甲旁亢患者合并維生素D缺乏。原發(fā)性甲旁亢術(shù)后1月時(shí)血清PTH升至最高，約1年回復(fù)至正常范圍內(nèi)。原發(fā)性甲旁亢患者常伴有甘油三酯升高(1.95±1.75mmol/l)，餐后兩小時(shí)血糖升高(8.07±2.21 mmol/l)，有47.39％的患者合并有高血壓。甲狀旁腺腺癌患者較甲狀旁腺腺瘤的患者病程更短(中位病程4個(gè)月vs13個(gè)

5、月，P=0.004)，血鈣更高(中位血鈣3.28mmol/l vs2.89mmol/l，P<0.001)，血清PTH水平更高(中位血清PTH1643pg/dl vs351.4pg/dl，P<0.001)以及腫瘤體積更大(3.57±1.30cm vs2.50±1.19cm，P=0.037)。良惡性甲狀旁腺組織中均存在基因拷貝數(shù)變異(5.79個(gè)vs7.86個(gè))。CCND1基因拷貝數(shù)增加在甲狀旁腺癌組織中較甲狀旁腺腺瘤組織中多見(jiàn)(71％vs2

6、1％)。良惡性甲狀旁腺腫瘤組織，Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因DNA甲基化異常很常見(jiàn)。惡性甲狀旁腺腫瘤組織SFRP2基因DNA甲基化水平明顯高于良性組織(28.16±2.01％vs6.01±3.98％，P=0.038)，SFRP2基因啟動(dòng)子區(qū)H3K9二甲基化狀態(tài)惡性組顯著高于良性組(P=0.039)。SFRP2基因DNA甲基化以及組蛋白H3K9甲基化可共同作用，抑制SFRP2基因轉(zhuǎn)錄，減少SFRP2基因mRNA表達(dá)，激活Wnt信號(hào)通路，從而促進(jìn)