FISH檢測快速診斷曲霉菌感染的臨床價值.pdf

1、目的：曲霉菌是自然界廣泛存在的真菌，是引起侵襲性真菌感染（IFI）的主要病原菌。IFI多見于免疫受損人群，死亡率較高，而臨床缺乏快速診斷方法，其實驗室早期診斷至關(guān)重要。本研究旨在探討熒光原位雜交技術(shù)（FISH）在檢測系統(tǒng)性曲霉感染臨床標本的可行性和特異性，以期早期診斷真菌感染。
　　 方法：實驗組為27例可疑真菌感染的福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片，陽性對照為標準曲霉菌，陰性對照為未感染曲霉菌的組織石蠟切片，空白對照是不加探針

2、的標本切片。將石蠟切片進行二甲苯脫蠟、系列乙醇水化。以上分組采用經(jīng)地高辛末端標記的與曲霉菌18S rRNA序列互補的18S-1寡核苷酸探針分別進行FISH檢測，同時對組織石蠟切片進行HE及PAS染色。
　　 結(jié)果：實驗組中14例標本可見陽性雜交信號，雜交信號為綠色顆粒狀熒光；13例未見雜交信號。陽性對照顯示菌絲壁及菌絲內(nèi)雜交信號呈綠色的顆粒狀，呈局灶性或散在分布。陰性對照及空白對照未見雜交信號。HE及PAS染色可疑真菌感染分別為

3、23例和27例，部分組織顯示真菌的菌絲體，HE染色菌絲呈現(xiàn)紅色，著色不良，PAS染色菌絲呈品紅色，不能鑒定真菌種屬。
　　 討論 本研究利用針對曲霉菌靶序列的探針特異地檢測出組織石蠟切片中的曲霉菌，其陽性信號清晰可見，可確定曲霉菌感染，因此可根據(jù)不同種屬曲霉菌設計出DNA序列特異性探針，明確各種曲霉菌種。而HE及PAS染色只能從形態(tài)學上觀察真菌形態(tài)，易漏診、誤診，更不能鑒別真菌菌種。在進一步的研究中有望應用該FISH方法快速檢測