苦參堿對腎移植大鼠靜脈血IL-6及IFN-γ表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過在近交系大鼠SD及Wistar之間建立的同種異體腎移植急性排斥反應(yīng)模型上進行實驗，檢測腎移植受體大鼠靜脈血中細(xì)胞因子IL-6及IFN-γ表達(dá)水平的變化，研究苦參堿(Matrine，Mat)對大鼠腎移植急性排斥反應(yīng)的抑制作用及效應(yīng)，進一步探討苦參堿免疫抑制作用的分子生物學(xué)機制，以及苦參堿與環(huán)孢菌素A(CyclosprinA，CsA)是否存在協(xié)同效應(yīng)，以期苦參堿的使用能減少CsA的用量，減輕其毒副作用，為器官移植的免疫抑制劑用藥可

2、能提供一種新穎、安全的方案，為今后器官移植免疫抑制劑的開發(fā)利用打下堅實的基礎(chǔ)。　　方法：用近交系SD大鼠作為腎移植供體，近交系Wistar大鼠為腎移植受體，分為7組。用改良腎移植術(shù)建立同種異基因/同基因原位腎移植急性排斥反應(yīng)實驗動物模型，術(shù)后按施加的處理因素不同將腎移植急性排斥反應(yīng)動物模型分為Ⅰ～Ⅳ組，每組12只：Ⅰ組(生理鹽水組，N.S組，N.S1ml.kg-1.d-1，ip)；Ⅱ組(Mat組，Mat10mg.kg-1.d-1，ip

3、)；Ⅲ組(CsA組，CsA2.5mg.kg-1.d-1，ip)；Ⅳ組(Mat+CsA組，Mat10mg.kg-1.d-1+CsA2.5mg.kg-1.d-1，ip)。對照組Ⅴ～Ⅶ組：Ⅴ組(同基因移植組)，為Ⅰ～Ⅳ組同種異基因腎移植手術(shù)對照組，建立近交系Wistar→Wistar同基因腎移植模型12只，術(shù)后予N.S腹腔注射；Ⅵ組(手術(shù)對照組)，為Ⅰ～Ⅴ組腎移植手術(shù)對照組，為腎移植假手術(shù)組，近交系Wistar大鼠12只，術(shù)后予N.S腹腔注射

4、；Ⅶ組(正常對照組)，為Ⅰ～Ⅵ組手術(shù)對照組，近交系Wistar大鼠12只，每天予N.S腹腔注射，正常飼養(yǎng)。從每組中隨機抽取6只，觀察受體鼠的存活時間，每日尿量及泌尿持續(xù)時間。另6只于術(shù)后7天處死，取下腔靜脈血檢測血肌酐(Scr)及血尿素氮(Bun)水平，應(yīng)用ELISA法檢測靜脈血IL-6及IFN-γ表達(dá)水平，完整留取移植腎行病理切片觀察病理改變。用ANOVA和Dunnett'sT3方差分析方法分析Mat、CsA、Mat+CsA對腎移植大

5、鼠存活時間、泌尿持續(xù)時間、腎功能指標(biāo)的影響，以及對靜脈血IL-6及IFN-γ表達(dá)水平變化的影響?！　〗Y(jié)果：3個對照組大鼠均長期存活，超過100天，生理鹽水組受體大鼠在術(shù)后8天內(nèi)死亡，平均存活6.83±0.75天，Mat組受體大鼠平均存活10.16±1.17天，延長了受體鼠的存活時間，CsA組受體大鼠平均存活11.50±1.05天，Mat與CsA聯(lián)合應(yīng)用后，可明顯延長受體鼠的存活時間至17天以上(20.33±2.58天)，Mat組與生理

6、鹽水組相比較，存在顯著差異(P=0.000＜0.05)；Mat組與CsA組相比較無明顯差異(P=0.558＞0.05)；Mat+CsA組與Mat組及CsA組相比較均存在顯著差異(P=0.000＜0.05)。各組與生理鹽水組相比較均增加了尿量，延長了泌尿持續(xù)時間，腎功能指標(biāo)Scr、Bun的水平(術(shù)后第7天取下腔靜脈血)正常對照組水平最低(Scr=46.31±5.65umol/L，Bun=4.21±0.21mmol/L)，生理鹽水組Scr、

7、Bun均明顯高于其他各組，且存在顯著差異(P=0.000＜0.05)；Mat組及CsA組與Mat+CsA組間的差異有顯著性(P=0.000＜0.05)?！　∫浦材I組織病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)為：正常對照組及假手術(shù)組形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；同基因移植組表現(xiàn)為臨界級，少量的間質(zhì)細(xì)胞浸潤，輕度腎小管炎；CsA組為ⅠA/ⅠB級，表現(xiàn)為混合性排斥反應(yīng)樣改變，有間質(zhì)細(xì)胞浸潤伴局灶性的輕-中度腎小管炎；Mat組為ⅡA/ⅡB級，亦表現(xiàn)為混合性排斥反應(yīng)樣改變，但間質(zhì)細(xì)胞浸

8、潤明顯伴輕-中度、重度動脈內(nèi)膜炎；Mat+CsA組為ⅠA級，間質(zhì)細(xì)胞浸潤明顯減少伴局灶性的輕度腎小管炎；N.S組排斥反應(yīng)最為嚴(yán)重，為Ⅲ級，腎內(nèi)血管嚴(yán)重?fù)p害，出現(xiàn)透壁壞死性動脈內(nèi)膜性炎或纖維蛋白樣改變伴中層平滑肌壞死。各組移植腎Banff'97急性排斥反應(yīng)不同的分級評分：N.S組為6.00±0.00，Mat組為4.33±0.52，CsA組為2.67±0.52，Mat+CsA組為2.17±0.41，同基因移植組為1.00±0.00，差異有顯

9、著性意義(P=0.000＜0.05)，Mat+CsA在改善移植腎急性排斥反應(yīng)病理組織形態(tài)學(xué)方面上存在交互效應(yīng)?！　§o脈血中IL-6及IFN-γ的表達(dá)水平在3個對照組中很低，生理鹽水組的表達(dá)水平最高，與其他3個實驗組相比較存在顯著差異(P=0.000＜0.05)，Mat組與CsA組比較無明顯差異(P＞0.05)，Mat+CsA組與Mat組及CsA組相比較均存在顯著差異(P=0.000＜0.05)，從而得出苦參堿有一定的免疫抑制作用，且其

10、與CsA在減輕急性排斥反應(yīng)所致組織學(xué)改變上及免疫抑制作用上存在協(xié)同效應(yīng)?！　〗Y(jié)論：苦參堿對大鼠同種異基因腎移植的急性排斥反應(yīng)起到一定的免疫抑制作用：能夠增加受體鼠的尿量，延長泌尿持續(xù)時間及存活天數(shù)，減輕急性排斥反應(yīng)對移植腎功能的損害；改善移植腎急性斥反應(yīng)病理組織形態(tài)學(xué)變化；可能通過下調(diào)IL-6、IFN-γ的表達(dá)水平而產(chǎn)生免疫抑制作用。并與免疫抑制作用已肯定的CsA存在協(xié)同效應(yīng)：苦參堿與CsA聯(lián)用可減少CsA的用量，從而減輕或一定程度上