2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、團頭魴(Megalobrama amblycephala)在我國淡水魚類中有著重要的經(jīng)濟地位,但其屬于不耐低氧的鯉科魚類,在大規(guī)模的經(jīng)濟養(yǎng)殖中極易因為缺氧死亡,從而限制其產(chǎn)量的提高。發(fā)掘主效基因的功能是進行水產(chǎn)動物遺傳育種基礎(chǔ)研究的重要內(nèi)容,而轉(zhuǎn)座子在功能基因的獲得和研究方面也起到了至關(guān)重要的作用,在水產(chǎn)動物分子育種方面有著潛在的應(yīng)用前景。
  結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor,CT

2、GF)為高度保守的CCN多肽家族中的成員,被命名為CCN2,是一種富含半胱氨酸的分泌肽。CTGF包括了 N-末端分泌肽和四個多功能結(jié)構(gòu)域,潛在影響多個信號傳導(dǎo)機制。研究表明,CCN2與結(jié)合的一些生長因子之間的相互作用介導(dǎo)了 CCN2對細(xì)胞增殖、存活、分化、粘附、遷移和細(xì)胞外基質(zhì)的生成產(chǎn)生影響。由于結(jié)締組織生長因子含有IGFBP結(jié)構(gòu)域,而IGFBP-1的內(nèi)含子中發(fā)現(xiàn)有發(fā)現(xiàn)缺氧誘導(dǎo)因子HRE,因此推測CTGF可能也參與團頭魴缺氧應(yīng)答相關(guān)分子

3、機制。
  本文獲得了團頭魴Ctgfa/b重復(fù)基因cDNA的全長序列,Ctgfa和Ctgfb基因全長分別為2153bp和1467bp,開放閱讀框分別為1032bp和1056bp,分別編碼343個和351個氨基酸。與人類和斑馬魚一樣,團頭魴成熟Ctgfa和Ctgfb多肽也包含4個區(qū)域:IGFBP、VWC、TSP_1和Cys_knot,分別包含的半胱氨酸基團數(shù)為11、10、5、11個。團頭魴Ctgfa和Ctgfb的編碼區(qū)相似度為57%

4、,團頭魴Ctgfa與人Ctgf和斑馬魚Ctgfa的相似度都分別為79%和96%,團頭魴Ctgfb與人Ctgf和斑馬魚Ctgfb的相似度都分別為56%和89%,由此可見Ctgfs在進化上具有較強的保守性。
  RT-PCR分析結(jié)果表明,團頭魴Ctgfa和Ctgfb基因在不同胚胎時期具有不同的表達模式。Ctgfa在0-12hpf階段表達量逐漸下降,從16hpf開始表達明顯增加,32hpf后表達量趨于穩(wěn)定;Ctgfb在0-20hpf階段

5、表達量都較弱,比較恒定且差異不明顯,從24hpf開始,表達量逐漸增加。Ctgfb在0-40hpf胚胎時期,尤其從24hfp開始,表達量都比Ctgfa低得多。在成年團頭魴中,Ctgfa在除心臟、肝臟和性腺外的所有組織中均有表達,而Ctgfb在所有組織中均有表達,但表達量較Ctgfa要弱得多,在腦和鰓中Ctgfa和Ctgfb的表達量都是所有組織中最多的。整胚原位雜交結(jié)果顯示,在團頭魴胚胎中 Ctgfa mRNA在后腦、脊索中表達,Ctgfb

6、 mRNA主要在脊索中表達,但表達量要少于Ctgfa。
  本文還開展了PiggyBac轉(zhuǎn)座子和PB-Tgf2復(fù)合轉(zhuǎn)座系統(tǒng)介導(dǎo)的團頭魴轉(zhuǎn)基因效率研究。分別構(gòu)建了帶有2種不同啟動子的供體質(zhì)粒pPBs-EF1α-eGFP和pPBs-Tgf2-RPrmP-eGFP,以及輔助質(zhì)粒pCS2-PBTP,將供體質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座酶mRNA共同注射到團頭魴的受精卵中。PCR顯示,這兩種轉(zhuǎn)座系統(tǒng)在團頭魴成魚基因組中的整合效率分別為為53.04%和32.14

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