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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1)探討離體全肝切除自體肝移植術(shù)(ELRA)治療晚期肝臟泡球蚴病(AE)的適應(yīng)癥,可行性,安全性和有效性;評(píng)價(jià)三維重建影像評(píng)估系統(tǒng)與個(gè)體化虛擬手術(shù)的臨床意義;初步探討ELRA術(shù)后移植物增生的規(guī)律;評(píng)價(jià)ELRA術(shù)經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益;
2)建立Wistar大鼠極限肝切除模型,評(píng)價(jià)極限肝切除術(shù)后的肝再生和存活率;
3)建立Wistar大鼠慢性肝損傷模型,探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)和慢性肝纖維化肝再生修
2、復(fù)的關(guān)系及可能機(jī)制;
4)探討TLR3通路與BMSCs在慢性肝纖維化中的相互作用和與肝纖維化肝再生修復(fù)的可能機(jī)制。
方法:
課題第一部分:
1)總結(jié)2010年8月至2013年08月按納入標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施的10例ELRA術(shù)治療晚期肝AE患者的臨床資料,分析臨床資料,探討臨床適應(yīng)癥;
2)通過術(shù)前CT與三維肝臟重建軟件測(cè)量數(shù)據(jù)和手術(shù)探查所見與移植物實(shí)際質(zhì)量結(jié)果分析,分析個(gè)體化虛擬手術(shù)設(shè)計(jì)的準(zhǔn)確性和可
3、行性。
3)通過患者術(shù)中情況、并發(fā)癥和住院總費(fèi)用等臨床資料,分析手術(shù)可行性和安全性。
4)術(shù)后CT隨訪1,3和6月移植肝體積(GV)和受體標(biāo)準(zhǔn)肝體積(SLV)比,結(jié)合術(shù)后PET/CT檢查結(jié)果,分析半年內(nèi)肝臟增生變化。
課題第二部分:對(duì)Wistar大鼠分別行70%、80%、90%肝體積極限切除,統(tǒng)計(jì)術(shù)后各組大鼠的存活率,并檢測(cè)外周血清中ALT及AST濃度,對(duì)比術(shù)后14天存活大鼠肝臟質(zhì)量。HE染色觀察三組肝臟組
4、織形態(tài)學(xué)變化。
課題第三部分:取雄性大鼠股骨和脛骨骨髓,提取、分離培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增 BMSCs,使用光學(xué)顯微鏡觀察 BMSCs的形態(tài),用免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè) BMSCs表面 CD31、CD45、CD44、CD105、CD11b、CD29的表達(dá)陽性率。用二乙基亞硝胺(DEN)配成0.01%濃度飲用水供雌性大鼠飲用16周換正常水,建立慢性肝損傷模型,第4、8、12、16周經(jīng)尾靜脈輸注1×106個(gè)BMSCs,并設(shè)置單純?cè)炷=M及
5、空白對(duì)照組;20周核磁共振(MRI)檢查大鼠肝臟;21周處死大鼠,HE染色觀察肝臟組織形態(tài)變化;原位雜交技術(shù)檢測(cè)大鼠肝臟SrY表達(dá);VG染色觀察肝臟中膠原纖維量;IHC檢測(cè)α-SMA、TLR3;Western-blotting檢測(cè)肝臟α-SMA、TLR3、TRIF、NF-kBp65、IRF3表達(dá),F(xiàn)Q-RT-PCR檢測(cè)TLR3、IRF3 mRNA表達(dá)。
結(jié)果:
課題第一部分:
1)10例移植物均存活,符合納
6、入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)手術(shù)安全性較高。
2)術(shù)中探查與移植物體積和術(shù)前CT與肝臟三維重建結(jié)果一致,10例患者GV/SLV在41%-78%之間,平均60.6%,其中9例患者虛擬切除移植物體積695.11±142.14cm3,實(shí)際余肝臟體積687.78±130.81cm3(P>0.05);
3)術(shù)中1例經(jīng)臍靜脈低溫灌注外,余9例經(jīng)門靜脈灌注;2例無肝期未搭橋,3例下腔靜脈搭橋,5例人造血管腔靜脈搭橋臨時(shí)性門體分流;手術(shù)11.5~20.
7、5h,平均15.2h,無肝期200-435min,中位時(shí)間285.5min,術(shù)中輸注紅細(xì)胞懸液0~15u,術(shù)后住院時(shí)間21~58d,總并發(fā)癥發(fā)生率6例(60%);住院總費(fèi)用10.16~43.48萬元,中位費(fèi)用17.44萬元;
4)CT測(cè)術(shù)后第1月移植物體積平均增加14.75%;術(shù)后2~3月平均每月增加3.75%;術(shù)后4~6月平均每月增加3.08%;術(shù)后半年移植物/標(biāo)準(zhǔn)肝體積比平均87.5%;PET/CT測(cè)18氟-脫氧葡萄糖(1
8、8F-FDG)的平均標(biāo)準(zhǔn)攝取率(SUVave)0.9~1.9;隨訪時(shí)間2~37個(gè)月,1例術(shù)后6個(gè)月死亡,最長存活時(shí)間27個(gè)月。
課題第二部分:
1)大鼠肝切術(shù)后6h開始出現(xiàn)死亡,術(shù)后8-12h為死亡高峰,70%、80%、90%肝體積切除組2周存活率分別為86.7%、80%、7%。
2)80%及90%肝體積切除組術(shù)后8h、12h時(shí)血清ALT、AST濃度比70%組顯著增高(P﹤0.05),而80%與90%組之間
9、無差異(P﹥0.05);80%組術(shù)后24h、3天時(shí)血清ALT及AST濃度比70%肝體積切除組高(P﹤0.05);術(shù)后7天左右各組ALT及AST濃度基本恢復(fù)正常。
3)術(shù)后14天80%組剩余肝體積明顯大于70%肝體積切除組(P﹤0.05)。
4)三組肝臟組織形態(tài)無明顯異常。
課題第三部分:
1)P3代BMSCs細(xì)胞表面的CD31、CD45、CD44、CD105、CD11b、CD29的陽性率分別為(1
10、2.0%、8%、1.2%、62.2%、1.5%、16.7%);
2)原位雜交技術(shù)檢測(cè)示僅有BMSCs移植組表達(dá)SrY。
3)核磁共振結(jié)果示BMSCs移植組肝臟上結(jié)節(jié)數(shù)量比單純?cè)炷=M多(P<0.05);
4)HE染色顯示單純?cè)炷=M8只輕度肝纖維化形成;BMSC移植組中9只形成明顯的肝纖維化,1只形成肝癌;空白對(duì)照組無肝纖維化形成。
5)IHC顯示BMSCs移植組比單純?cè)炷=Mα-SMA陽性表達(dá)率高(P
11、<0.05);空白對(duì)照組無表達(dá)。TLR3主要表達(dá)于肝細(xì)胞包漿中;
6)VG染色BMSCs移植組膠原區(qū)的百分比數(shù)比單純?cè)炷=M高(P<0.05)。
7)western blotting結(jié)果顯示BMSCs移植組比單純?cè)炷=Mα-SMA蛋白水平高(P<0.05),BMSCs移植組肝臟中TLR3、NF-kBp65、IRF3蛋白水平及 TLR3、IRF3mRNA表達(dá)比空白對(duì)照組和單純?cè)炷=M都高(P均<0.05),單純?cè)炷=M稍高于空
12、白對(duì)照組(P<0.05);而TRIF蛋白表達(dá)水平在三組間無明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1)對(duì)于外科原位手術(shù)切除極為困難或無法切除的晚期肝AE可以通過ELRA術(shù)治療,適應(yīng)癥為本研究納入標(biāo)準(zhǔn);CT和三維肝臟重建軟件能夠在術(shù)前準(zhǔn)確評(píng)估肝臟病灶與主要管道關(guān)系,評(píng)價(jià)病灶侵犯程度和預(yù)測(cè)移植物體積,提高手術(shù)安全性;在無肝期個(gè)體化處理進(jìn)行人造血管腔靜脈搭橋,臨時(shí)性門體分流技術(shù),下腔靜脈免重建技術(shù)和離體肝切除血管重建技術(shù)等綜合
13、應(yīng)用安全、有效;術(shù)后移植肝再生主要發(fā)生于術(shù)后半年內(nèi),尤其是術(shù)后第1個(gè)月,術(shù)后2~6月明顯放緩,半年后基本接近患者標(biāo)準(zhǔn)肝體積;ELRA術(shù)治療晚期肝AE有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益,有助于在國內(nèi)外推廣應(yīng)用;
2)大鼠肝切除量在80%以下是安全的,提示對(duì)于正常成人極限肝切體積有可能超越70%;且肝臟切除量越大,肝臟增生體積越多;
3)BMSCs在DEN所致的慢性肝損傷模型中具有促進(jìn)肝纖維化的作用,并有致肝癌的可能;
4
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