低氧預(yù)適應(yīng)對自體原位肝移植大鼠腸道黏膜屏障影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、l、目的：本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠自體原位肝移植模型的基礎(chǔ)上，術(shù)前對大鼠給予一定的低氧預(yù)適應(yīng)(hypoxic preconditioning，HP)處理，通過觀察術(shù)后不同時段腸組織光鏡、電鏡下的改變；腸組織HIF-1a的表達(dá)、IgA漿細(xì)胞數(shù)量的變化；腸組織丙二醛(MDA)的測定及相應(yīng)時段肝功能的變化：探討腸道黏膜屏障功能的損害與移植肝缺血再灌注早期損傷的關(guān)系，研究低氧預(yù)適應(yīng)在肝移植過程中對腸道黏膜屏障的影響，從而為臨床肝臟移植采取合理的手段，減

2、輕肝臟損傷提供理論依據(jù)和可能的技術(shù)路徑。 2、方法： 2.1 SD大鼠，隨機(jī)分為3組，A組：低氧預(yù)適應(yīng)自體原位肝移植組(n=50)，大鼠術(shù)前24h給予氣體流量5L/min的8％氮氧混合氣體(含氧氣8％，其余為氮?dú)?處理90min；B組：自體原位肝移植組(n=50)；C組：假手術(shù)組(n=8)。 2.2 A、B組大鼠均在術(shù)后1h、6h、12h、24h、48h各取8只處死，經(jīng)腹主動脈采血作肝功能檢測。自曲氏韌帶向下5c

3、m處切取小腸組織立即置液氮然后放-80℃冰箱保存待MDA檢測。另取腸組織標(biāo)本，HE染色切片觀察顯微結(jié)構(gòu)的變化，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)的變化，免疫組織化學(xué)染色切片應(yīng)用MiVnt顯微圖象分析系統(tǒng)觀察腸組織HIF-la的表達(dá)及IgA漿細(xì)胞數(shù)量的變化。 3、結(jié)果：． (1)大鼠手術(shù)成功的標(biāo)準(zhǔn)：大鼠即刻蘇醒、翻身，并能維持有效的乎吸、心跳。A組和B組有效大鼠例數(shù)各為50例，無肝期控制為(20±2.2)min，兩組無明顯差異(P>O.05

4、)。A、B兩組各取10只觀察術(shù)后一周生存率，A組和B組分別為90.0％(9/10)和80.0％(8/10)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 (2)A組、B組腸道黏膜顯微結(jié)構(gòu)變化：按照Chiu等腸組織病理學(xué)評分，腸黏膜的病理變化結(jié)果顯示，A組術(shù)后各時段腸黏膜損傷較B組術(shù)后相應(yīng)時段減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)A、B二組術(shù)后各時段腸組織HIF-la表達(dá)均增加，術(shù)后24h的表達(dá)仍維持在較高水平，48h H

5、IF-la的表達(dá)呈減退趨勢，A組各時段較B組各相應(yīng)時段HIF-la的表達(dá)增加明顯。A、B二組IgA漿細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量比較，術(shù)后24h B組即少于A組，術(shù)后48h差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (4)人組、B組腸道黏膜超微結(jié)構(gòu)變化：A組大鼠術(shù)后線粒體結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴清晰，細(xì)胞連接緊密；B組大鼠術(shù)后部分線粒體嵴模糊、甚至消失，基質(zhì)空泡化、密度減低，細(xì)胞連接松弛、模糊。 (5)術(shù)后不同時段各項(xiàng)指標(biāo)檢測。血清肝功能檢測顯示：A

6、、B組大鼠ALT、AST與C組相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P