ALDH1在乳腺癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)及其與浸潤、轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.pdf

1、背景及目的：
　　乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響了婦女的身心健康甚至危及生命。目前乳腺癌的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，國內(nèi)外多項(xiàng)研究認(rèn)為乳腺癌是一種腫瘤干細(xì)胞疾病。乳腺癌干細(xì)胞(breast cancer stem cells，BCSCs)可能是乳腺癌發(fā)生及治療后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。因此，徹底去除乳腺癌干細(xì)胞有可能徹底治愈乳腺癌。
　　乙醛脫氫酶1(aldehyde dehydrogenase1，ALDH1)已經(jīng)被證實(shí)為

2、乳腺癌干細(xì)胞的一個(gè)可靠的標(biāo)記物。ALDH1屬于乙醛脫氫酶家族中的一員，其表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且在乳腺癌干細(xì)胞表面高表達(dá)。ALDH1是一種能氧化細(xì)胞內(nèi)的醛類的解毒酶，在干細(xì)胞的分化早期氧化視黃醇而形成視黃酸。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤干細(xì)胞在粘附、遷移和侵襲能力等方面具有特征性。與分化子代細(xì)胞相比，腫瘤干細(xì)胞過表達(dá)多種侵襲相關(guān)的因子，包括CXC趨化因子受體4（CXC chemokine receptor4，CXCR

3、4）、CD44、MMP2等，提示腫瘤干細(xì)胞可能在惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中扮演重要的角色。
　　MMPs家族是一個(gè)高度保守的內(nèi)源性蛋白水解酶家族，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要調(diào)節(jié)物質(zhì)，幾乎能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分，其中MMP-2是家族中的主要成員之一，主要作用于基底膜上的Ⅳ型膠原，在腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障，發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮重要作用。
　　CXCR4屬于G蛋白耦聯(lián)7次跨膜受體，是CXC趨化因子家族成員基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(strom

4、al cell derived factor-1，SDF-1)/CXCL12的受體，與其配體SDF-1構(gòu)成的SDF-1-CXCR4生物學(xué)軸，可能在多種惡性腫瘤細(xì)胞移動(dòng)、浸潤、轉(zhuǎn)移和增殖中發(fā)揮重要作用。
　　有關(guān)聯(lián)合檢測(cè)ALDH1、MMP2、CXCR4三者在乳腺癌浸潤性導(dǎo)管癌(invasiveductal carcinoma, IDC)原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)及其與乳腺癌浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究，至今尚未見有報(bào)道。且對(duì)ALDH

5、1的生物學(xué)功能研究不多，對(duì)其作用機(jī)理也知之甚少。為了探討ALDH1標(biāo)記的乳腺癌干細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)以及與乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系和可能的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)SP法及原位雜交技術(shù)分別檢測(cè)ALDH1、MMP2、CXCR4蛋白及ALDH1 mRNA在90例乳腺癌原發(fā)灶及相應(yīng)的60例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況，旨在探討三者之間的相互關(guān)系及可能的作用機(jī)制，為乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移的治療開辟新的思路。
　　方法：
　　1

6、.采用免疫組化SP法檢測(cè)90例IDC原發(fā)灶組織和相應(yīng)的60例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中ALDH1、MMP2、CXCR4蛋白的表達(dá)。
　　2.采用原位雜交技術(shù)檢測(cè)90例IDC原發(fā)灶組織和相應(yīng)的60例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中ALDH1mRNA的表達(dá)。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，率的比較采用x2檢驗(yàn)(chi-square)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.

7、在90例乳腺IDC原發(fā)灶中，ALDH1蛋白、ALDH1mRNA、MMP2蛋白、CXCR4蛋白的陽性表達(dá)率分別為27.8％(25/90)，30％(27/90)，70.0％(63/90)，76.7％(69/90)。在60例原發(fā)灶及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1蛋白(mRNA)的陽性率分別為28.3％(31.7％)、35％(35％)，且在兩個(gè)部位的表達(dá)相互呈正相關(guān)，且ALDH1蛋白及mRNA在原發(fā)灶及相應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)分布特征相似，均

8、為散在或小簇狀分布;MMP2蛋白的陽性率分別為81.7％、75.0％，在兩個(gè)部位的表達(dá)無相關(guān)性;CXCR4蛋白的陽性率分別為85.0％、80.0％，在兩個(gè)部位的表達(dá)無相關(guān)性。
　　2.在90例乳腺IDC原發(fā)灶中，ALDH1蛋白及mRNA的表達(dá)均與較高組織學(xué)分級(jí)，ER陰性表達(dá)，PR陰性表達(dá)正相關(guān)(P＜0.05); MMP2蛋白與CXCR4蛋白的表達(dá)均與組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)(P＜0.05)。在60例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1蛋

9、白及mRNA的表達(dá)均與ER陰性表達(dá)，PR陰性表達(dá)正相關(guān)(P＜0.05);MMP2蛋白與CXCR4蛋白的表達(dá)與乳腺IDC的臨床病理特征均無關(guān)(P＞0.05)。
　　3.在90例乳腺IDC原發(fā)灶中，ALDH1蛋白和MMP-2蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.298，P＜0.05);ALDH1蛋白和CXCR4蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.283，P＜0.05);MMP-2蛋白和CXCR4蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.556，P＜0.05)，且MM

10、P2與CXCR4蛋白在ALDH1表達(dá)陽性組的陽性率顯著高于表達(dá)陰性組的陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在60例乳腺IDC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1蛋白和MMP-2蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.343，P＜0.05); ALDH1蛋白和CXCR4蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.280，P＜0.05); MMP-2蛋白和CXCR4蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.481，P＜0.05)，且MMP2與CXCR4蛋白在ALDH1表達(dá)陽性組的陽性率

11、顯著高于表達(dá)陰性組的陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.在90例乳腺IDC原發(fā)灶中，ALDH1與MMP2蛋白共陽性的23例癌組織中，表達(dá)ALDH1的乳腺癌細(xì)胞同時(shí)表達(dá)MMP2蛋白的有20例(87.0％);ALDH1與CXCR4蛋白共陽性的24例癌組織中，表達(dá)ALDH1的乳腺癌細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CXCR4蛋白的有23例(95.8％)。在60例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1與MMP2蛋白共陽性的20例癌組織中，表達(dá)ALDH1的乳

12、腺癌細(xì)胞同時(shí)表達(dá)MMP2蛋白的有18例(90％);ALDH1與CXCR4蛋白共陽性的20例癌組織中，表達(dá)ALDH1的乳腺癌細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CXCR4蛋白的有19例(95％)。
　　結(jié)論：
　　1.ALDH1蛋白及mRNA在乳腺IDC原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中均有表達(dá)，且主要表達(dá)在ER陰性、PR陰性、低分化癌組織中。
　　2.在乳腺IDC中，ALDH1的表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與ALDH1陽性細(xì)胞同時(shí)表達(dá)MMP2及C