毛囊組織工程的前期實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文毛囊組織工程的前期實(shí)驗(yàn)研究姓名：孫錫金申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：整形外科學(xué)指導(dǎo)教師：胡志奇20070406中丈摘要不便于實(shí)驗(yàn)開(kāi)展。研究目的1建立適用于組織工程的大規(guī)模、高效、快速分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細(xì)胞和毛囊上皮細(xì)胞的方法2改進(jìn)大鼠觸須毛乳頭細(xì)胞和毛囊上皮細(xì)胞的分離方法3探索有效的毛囊重建的方法。研究方法1人頭皮毛乳頭細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和簽定。采用消化過(guò)濾法和顯微解剖法分離人頭皮毛乳頭細(xì)胞。將處理好的頭皮標(biāo)本沿真皮與

2、皮F組織交界處剪開(kāi)，將含有毛囊中下部的皮下組織剪碎，在37。C緩慢攪拌的條件F2ⅡJkO2％膠原酶I消化4小時(shí)，懸液經(jīng)400目篩網(wǎng)過(guò)濾，收集被篩網(wǎng)截留的毛乳頭，PBS液離心洗滌蘭次。解剖法參照文獻(xiàn)中的操作進(jìn)行。使用含15％FCS的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)，觀察其在體外培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特點(diǎn)，比較兩種分離方法的的貼壁率，并進(jìn)行aSMA免疫組化染色。2人頭皮毛囊上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。采用分步消化法獲得人毛囊上皮細(xì)胞，剪去頭

3、皮外毛發(fā)，置259／L的洗必泰溶液中浸泡消毒10—15min，然后在無(wú)菌的PBS中洗滌兩遍。用剪刀在頭皮內(nèi)側(cè)將含毛囊的真皮和皮下脂肪剪下，剪碎后在37“C緩慢攪拌(100rpm)的條件下加入02％膠原酶I消化4小時(shí)，懸液靜置，使含有毛囊上皮鞘的毛干沉淀，經(jīng)800目篩網(wǎng)過(guò)濾沈劑三遍，然后把收集到的毛1二用O1％的胰酶在25。C靜最消化10分鐘，加入含10％(體積比)胎牛血清的KSFM培養(yǎng)基，中止消化后吹打，混懸液經(jīng)800目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾液離