毛囊組織工程的前期實驗研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學碩士學位論文毛囊組織工程的前期實驗研究姓名：孫錫金申請學位級別：碩士專業(yè)：整形外科學指導教師：胡志奇20070406中丈摘要不便于實驗開展。研究目的1建立適用于組織工程的大規(guī)模、高效、快速分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細胞和毛囊上皮細胞的方法2改進大鼠觸須毛乳頭細胞和毛囊上皮細胞的分離方法3探索有效的毛囊重建的方法。研究方法1人頭皮毛乳頭細胞的分離、培養(yǎng)和簽定。采用消化過濾法和顯微解剖法分離人頭皮毛乳頭細胞。將處理好的頭皮標本沿真皮與

2、皮F組織交界處剪開，將含有毛囊中下部的皮下組織剪碎，在37。C緩慢攪拌的條件F2ⅡJkO2％膠原酶I消化4小時，懸液經(jīng)400目篩網(wǎng)過濾，收集被篩網(wǎng)截留的毛乳頭，PBS液離心洗滌蘭次。解剖法參照文獻中的操作進行。使用含15％FCS的DMEM培養(yǎng)基進行毛乳頭細胞的培養(yǎng)，觀察其在體外培養(yǎng)的形態(tài)學和生物學特點，比較兩種分離方法的的貼壁率，并進行aSMA免疫組化染色。2人頭皮毛囊上皮細胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。采用分步消化法獲得人毛囊上皮細胞，剪去頭

3、皮外毛發(fā)，置259／L的洗必泰溶液中浸泡消毒10—15min，然后在無菌的PBS中洗滌兩遍。用剪刀在頭皮內(nèi)側將含毛囊的真皮和皮下脂肪剪下，剪碎后在37“C緩慢攪拌(100rpm)的條件下加入02％膠原酶I消化4小時，懸液靜置，使含有毛囊上皮鞘的毛干沉淀，經(jīng)800目篩網(wǎng)過濾沈劑三遍，然后把收集到的毛1二用O1％的胰酶在25。C靜最消化10分鐘，加入含10％(體積比)胎牛血清的KSFM培養(yǎng)基，中止消化后吹打，混懸液經(jīng)800目篩網(wǎng)過濾，濾液離