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1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文新型組織工程皮膚種子細(xì)胞—毛囊干細(xì)胞的實驗研究姓名:華云旗申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:李秀蘭20070501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文(天津市科委重點(diǎn)攻關(guān)項目03380291l,003112211)性的干預(yù)作用。通過FSC形態(tài)學(xué)的改變,研究真皮來源的FB對FSC多分化潛能的影響。實驗結(jié)果:1兩種分離方法比較顯示:“兩步酶”法可以獲取大量Bl整合素、CKl9表達(dá)陽性具有高增殖活性的FSC;2
2、傳代FSC接種24h后含10%胎牛血清(FetalBovineSerumFBS)的KSFM培養(yǎng)環(huán)境中細(xì)胞幾乎全部貼壁;無血清的肛SFM中細(xì)胞未完全貼壁;MEM中細(xì)胞貼壁率最低且細(xì)胞均呈圓形,少數(shù)貼壁細(xì)胞的折光差。不同濃度FBS培養(yǎng)環(huán)境對FSC增殖影響結(jié)果顯示:不同血清濃度各組問方差分析比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(PO05),F(xiàn)SC適宜培養(yǎng)環(huán)境為含10%胎牛血清的KSFM的培養(yǎng)環(huán)境。3FSc體外生長曲線顯示:細(xì)胞3天后開始迅速增殖,一周后進(jìn)入
3、緩慢增殖期,隨后進(jìn)入長達(dá)30天的生長平臺期。且發(fā)現(xiàn)在長期培養(yǎng)過程中細(xì)胞與細(xì)胞之間無明顯的接觸性抑制現(xiàn)象,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期結(jié)果顯示:傳代后的FSC處于增殖的G1期細(xì)胞占為736%,G1期細(xì)胞變異指數(shù)cv為39,獲取的細(xì)胞均一性好。4“兩步酶”分離法同樣可以從人頭皮組織中獲取大量CKl9、B1整合索表達(dá)陽性的FSC;5與ESC生長曲線相比,F(xiàn)SC具有更高的增殖活性且有一個相對較長保持高增殖活性的生長期。ESC中只有部分細(xì)胞表達(dá)131整
4、合素,F(xiàn)SC均表達(dá)Bl整合素,細(xì)胞陽性率幾乎100%;6FB與FSC共培養(yǎng)后細(xì)胞外LDH檢測結(jié)果顯示:共培養(yǎng)的FSC增殖活性增強(qiáng),單純毛囊干細(xì)胞與共培養(yǎng)比較,統(tǒng)計學(xué)分析顯示:差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P(O05)。共培養(yǎng)后的FSC形態(tài)由短棒樣梭形細(xì)胞變?yōu)楸砥蛹?xì)胞形態(tài)。實驗結(jié)論:1“兩步酶”法是一種高效、快速獲取CKl9、B1整合素陽性表達(dá)的FSC的分離方法。2獲取的FSC具有高增殖能力,細(xì)胞均一且能夠長期在體外擴(kuò)增形成復(fù)層結(jié)構(gòu)。3血清提高加強(qiáng)
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