新型組織工程皮膚種子細胞—毛囊干細胞的實驗研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文新型組織工程皮膚種子細胞—毛囊干細胞的實驗研究姓名：華云旗申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：李秀蘭20070501天津醫(yī)科大學碩士學位論文(天津市科委重點攻關項目03380291l，003112211)性的干預作用。通過FSC形態(tài)學的改變，研究真皮來源的FB對FSC多分化潛能的影響。實驗結果：1兩種分離方法比較顯示：“兩步酶”法可以獲取大量Bl整合素、CKl9表達陽性具有高增殖活性的FSC；2

2、傳代FSC接種24h后含10％胎牛血清(FetalBovineSerumFBS)的KSFM培養(yǎng)環(huán)境中細胞幾乎全部貼壁；無血清的肛SFM中細胞未完全貼壁；MEM中細胞貼壁率最低且細胞均呈圓形，少數(shù)貼壁細胞的折光差。不同濃度FBS培養(yǎng)環(huán)境對FSC增殖影響結果顯示：不同血清濃度各組問方差分析比較，差異有統(tǒng)計學意義(PO05)，F(xiàn)SC適宜培養(yǎng)環(huán)境為含10％胎牛血清的KSFM的培養(yǎng)環(huán)境。3FSc體外生長曲線顯示：細胞3天后開始迅速增殖，一周后進入

3、緩慢增殖期，隨后進入長達30天的生長平臺期。且發(fā)現(xiàn)在長期培養(yǎng)過程中細胞與細胞之間無明顯的接觸性抑制現(xiàn)象，流式細胞儀分析細胞周期結果顯示：傳代后的FSC處于增殖的G1期細胞占為736％，G1期細胞變異指數(shù)cv為39，獲取的細胞均一性好。4“兩步酶”分離法同樣可以從人頭皮組織中獲取大量CKl9、B1整合索表達陽性的FSC；5與ESC生長曲線相比，F(xiàn)SC具有更高的增殖活性且有一個相對較長保持高增殖活性的生長期。ESC中只有部分細胞表達131整

4、合素，F(xiàn)SC均表達Bl整合素，細胞陽性率幾乎100％；6FB與FSC共培養(yǎng)后細胞外LDH檢測結果顯示：共培養(yǎng)的FSC增殖活性增強，單純毛囊干細胞與共培養(yǎng)比較，統(tǒng)計學分析顯示：差異有統(tǒng)計學意義(P(O05)。共培養(yǎng)后的FSC形態(tài)由短棒樣梭形細胞變?yōu)楸砥蛹毎螒B(tài)。實驗結論：1“兩步酶”法是一種高效、快速獲取CKl9、B1整合素陽性表達的FSC的分離方法。2獲取的FSC具有高增殖能力，細胞均一且能夠長期在體外擴增形成復層結構。3血清提高加強