血管組織工程的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、血管疾病是危及人類健康的常見疾病之一，其主要的治療手段是血管移植術(shù)。因此血管移植物的來源就成為人們關(guān)注的重要課題。目前臨床上應(yīng)用的血管移植物主要有自體血管、異體血管和人工材料三種來源，但不能滿足臨床需求。因?yàn)樽泽w血管來源有限，異體血管容易產(chǎn)生免疫排異反應(yīng)，人工材料不適合作為小口徑血管移植物，遠(yuǎn)期通暢率低。 組織工程學(xué)的興起為血管移植物的來源提供了一條嶄新的思路。血管組織工程是利用血管壁的正常細(xì)胞和生物可降解材料來制備、重建和再生

2、血管替代材料的一門科學(xué)，使在體外培植具有生物活性，結(jié)構(gòu)、功能與自體血管相類似的人工血管成為可能。 本實(shí)驗(yàn)采用大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞作為種子細(xì)胞的來源，明膠-殼聚糖和生物蛋白膠作為支架材料，進(jìn)行了組織工程血管的體外構(gòu)建和體內(nèi)移植的實(shí)驗(yàn)研究。目的是探索血管組織工程的可行性途徑。本課題分為如下三部分： 第一部分血管組織工程種子細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定 目的：為血管組織工程的實(shí)驗(yàn)研究提供種子細(xì)胞。方法：全麻下取大鼠的主動(dòng)脈

3、，分別采用酶消化法和組織塊貼壁法獲取血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，并進(jìn)行兩種細(xì)胞的傳代、純化、免疫組化鑒定以及形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果：培養(yǎng)的兩種細(xì)胞符合血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的形態(tài)特征，免疫組化鑒定內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子(+)，平滑肌細(xì)胞α-肌動(dòng)蛋白(+)。結(jié)論：所培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞為血管組織工程提供了細(xì)胞來源。 第二部分：血管組織工程材料的生物相容性目的：研究明膠-殼聚糖的生物相容性，探索其作為血管組織工程材料的可行性。方法：將血

4、管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞接種在明膠-殼聚糖膜上，將多孔明膠-殼聚糖塊植入大鼠皮下。利用顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況及植入大鼠皮下后局部的組織病理學(xué)變化。結(jié)果：大鼠內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞在膜上均生長良好，皮下種植局部早期有輕度炎癥反應(yīng)，材料逐漸被降解吸收。結(jié)論：明膠-殼聚糖具有很好的生物相容性，可作為血管組織工程材料。 第三部分：組織工程血管的體外構(gòu)建及體內(nèi)移植目的：探討組織工程血管的體外構(gòu)建及體內(nèi)移植。方法：采用直接接種和與生物蛋白膠混合

5、接種兩種方法，分別將血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞接種到兩種血管支架材料上進(jìn)行體外培養(yǎng)，動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞的生長情況。將種植有血管平滑肌細(xì)胞的多孔明膠-殼聚糖血管支架植入大鼠皮下，10天后觀察體內(nèi)平滑肌細(xì)胞生長情況。結(jié)果：直接接種在膜狀殼聚糖血管支架的血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞呈單層生長；混合接種在多孔明膠-殼聚糖血管支架的平滑肌細(xì)胞呈多層生長；大鼠平滑肌細(xì)胞在皮下種植后能夠在支架上伸展生長。結(jié)論：平滑肌細(xì)胞與生物蛋白膠混合接種效果較好。本文的兩種支