PPARγ激動劑和全反式維甲酸對間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響.pdf

1、實驗目的:
　　研究PPARγ激動劑和全反式維甲酸對間充質(zhì)干細胞骨向分化的影響及可能機制。
　　實驗方法:
　　采用化學發(fā)光法、PCR、Western blot、報告質(zhì)粒等技術，研究PPARγ受體激動劑曲格列酮與全反式維甲酸對間充質(zhì)干細胞骨向分化的影響。具體方法如下:
　　1.檢測單獨及聯(lián)合使用曲格列酮(Tro)和/或全反式維甲酸(ATRA)后，早期成骨指標堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，A

2、LP）的活性變化。
　　2.檢測單獨及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后，礦化基質(zhì)沉積的變化。
　　3.從基因表達水平和蛋白質(zhì)表達水平檢測單獨及聯(lián)合使用Tro和/或ATRA后，MEFs細胞成骨晚期指標骨橋素(osteopontin，OPN)，骨鈣素(osteocalcin, OC)的表達情況。
　　4.利用重組腺病毒技術，過表達及干擾PPARγ2基因，檢測Tro和/或ATRA對MEFs細胞堿性磷酸酶活性的影響。
　　

3、5.利用報告質(zhì)粒及Western blot，檢測使用Tro和/或ATRA對BMPR-Smad信號通路轉(zhuǎn)錄活性的影響。
　　6.利用Oil-red染色及Western blot，檢測Tro和/或ATRA對MEFs細胞成脂分化的影響。
　　實驗結果:
　　1.Tro和ATRA聯(lián)合應用增強MEFs細胞ALP活性。
　　2.Tro和ATRA聯(lián)合應用增強MEFs細胞礦化基質(zhì)沉積。
　　3.Tro和ATRA聯(lián)合應用增加

4、MEFs細胞OPN及OC的表達。
　　4.過表達PPARγ2基因，可以增強Tro和ATRA聯(lián)合誘導的MEFs細胞ALP活性。
　　5.Tro和ATRA聯(lián)合應用能激活BMPR-Smad信號通路。
　　6.Tro和ATRA聯(lián)合應用能抑制Tro誘導MEFs細胞成脂分化。
　　實驗結論:
　　Tro與ATRA聯(lián)合應用能明顯誘導MEFs細胞成骨分化。這種作用可能與增強BMPR-Smad信號轉(zhuǎn)錄活性及抑制MEFs細胞成