HA-PEI納米顆粒介導Atoh1基因轉導豚鼠耳蝸細胞的研究.pdf

1、自1994年，F(xiàn)ujiyoshi研究小組成功制備了中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘堿性蛋白基因純合突變導致小鼠感音神經(jīng)性耳聾的模型以來，圍繞感音神經(jīng)性耳聾基因治療的研究逐漸展開。
　　感音神經(jīng)性耳聾主要是由聽覺感受器官---耳蝸的變性引起的。對人類顳骨解剖學研究發(fā)現(xiàn)，感音神經(jīng)性耳聾可由耳蝸多種細胞類型的變性引起，其中，承擔將聲音信號轉換為電信號的毛細胞病變，是目前針對感音神經(jīng)性耳聾研究的核心問題之一。以往，研究者們認為在哺乳動物體內，耳蝸毛細胞

2、損傷變性后是不可再生的。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)將包含毛細胞分化的關鍵基因---Atoh1/Math1基因的質粒導入體外培養(yǎng)的Corti器中，可以產(chǎn)生異位的毛細胞，本研究小組前期，利用腺病毒作為載體將Atoh1基因成功介導轉染至噪聲性聾的豚鼠耳蝸內，發(fā)現(xiàn)噪聲損傷的豚鼠耳蝸過表達Atoh1基因，可使受損耳蝸內產(chǎn)生大量新的內外毛細胞纖毛簇，促進聽功能的恢復。雖然腺病毒基因載體有較高的基因轉染效率，但是也有很明顯的缺點，其介導的基因轉染為瞬時轉染且

3、有很強的宿主免疫原性，且缺乏細胞特異性，難以通過倫理委員會的審查應用于臨床。此外，與腫瘤的基因治療研究目的不同的是，針對于腫瘤細胞的治療研究多是以殺細胞為目的，可以使用病毒載體，而耳科學研究多以促進細胞再生或修復為目的，病毒載體的缺點大大限制了其進一步應用。因此，為了篩選出適用于耳科研究的非病毒載體，本研究在研究小組前期工作的基礎上，研發(fā)合成新的納米基因載體，并利用其將包含Atoh1基因的質粒導入健康及噪聲致聾的豚鼠耳蝸內，運用聽功能檢

4、測和形態(tài)學檢測方法對新載體轉導基因的效率及生物學效應進行了初步研究。
　　第一部分，利用透明質酸(HA)對聚乙烯亞胺(PEI)納米顆粒進行修飾，獲得基于透明質酸修飾的聚乙烯亞胺納米顆粒基因載體(HA-PEI)，利用其介導Atoh1-EGFP基因質粒，通過完整圓窗膜滲透途徑對聽力正常豚鼠及噪聲性聾豚鼠進行耳蝸內轉導，觀察其在豚鼠耳蝸內的轉基因能力及生物學特性。
　　第二部分，利用前期合成的HA-PEI納米基因載體介導Atoh1