剪切力對(duì)豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響.pdf

1、一、目的:觀察體外培養(yǎng)的豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細(xì)胞在不同剪切力作用后的形態(tài)學(xué)改變及其可能的改變機(jī)理,進(jìn)一步豐富血迷路屏障通透性調(diào)控機(jī)理.二、方法:1.通過體外培養(yǎng)的方法,獲取單層融合的豚鼠耳蝸血管紋微血管內(nèi)皮細(xì)胞,豚鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞以及人臍V內(nèi)皮ECV-304的單層融合狀態(tài).2.設(shè)計(jì)一套由驅(qū)動(dòng)恒流泵、蠕動(dòng)泵、儲(chǔ)液器及若干導(dǎo)管組成的流體力學(xué)灌流系統(tǒng),通過控制流量產(chǎn)生不同力量對(duì)上述培養(yǎng)好的細(xì)胞施加剪切作用.3.對(duì)于豚鼠耳蝸微血管內(nèi)皮細(xì)胞我們?cè)O(shè)

2、計(jì)τ=0.883dyn/cm<'2>、0.976dyn/cm<'2>、1.184dyn/cm<'2>、2.929dyn/cm<'2>,四個(gè)剪切力,在0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、16h、24h 8個(gè)時(shí)相點(diǎn)用倒置相差顯微鏡對(duì)受到剪切力作用后的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,在對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行照相,用Tiger圖像分析儀進(jìn)行形狀參數(shù)Pyx和Q的測定.同樣,對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞設(shè)計(jì)剪切力大小為0.276dyn/cm<'2>、0.476dy

3、n/cm<'2>、1.069dyn/cm<'2>,對(duì)ECV-304細(xì)胞設(shè)計(jì)剪切力大小為5dyn/cm<'2>,觀察時(shí)相點(diǎn)及內(nèi)容同耳蝸微血管內(nèi)皮細(xì)胞,把各個(gè)觀測點(diǎn)的數(shù)據(jù)繪制成表,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出相應(yīng)的結(jié)果,以研究各個(gè)剪切力對(duì)不同細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響及其與時(shí)間的關(guān)系,并繪制成曲線圖.4.剪切過后的耳蝸微血管內(nèi)皮細(xì)胞用phalloidin進(jìn)行固定染色,對(duì)F-actin進(jìn)行激光共聚焦熒光染色觀察,繪制成不同剪切力下F-actin熒光含量表,并繪