姜黃素對(duì)去卵巢大鼠骨丟失的影響.pdf

1、目的:
　　絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoprosis，PMOP)是由于絕經(jīng)后雌激素缺乏引起破骨細(xì)胞的骨吸收和成骨細(xì)胞的骨形成之間的不平衡而發(fā)生的骨質(zhì)疏松，屬原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。本病以易引發(fā)骨折、致殘率及死亡率較高為其特征，嚴(yán)重影響中老年婦女健康和壽命，隨著人口老齡化的加劇，絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的問(wèn)題越來(lái)越突顯。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外已有研究證實(shí)，氧化應(yīng)激在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)病中起重要作用，用天然抗氧化劑防治骨質(zhì)疏松癥成

2、為一新的概念。
　　姜黃素(curcumin，C)是一種天然抗氧化劑，可在多種組織誘導(dǎo)血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)表達(dá)降低氧化應(yīng)激，從而對(duì)組織起保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)去卵巢建立大鼠PMOP模型，給予姜黃素灌胃進(jìn)行干預(yù)，采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)法測(cè)定血清氧化應(yīng)激指標(biāo)丙二醛(malondialdehyde，MDA)的含量，水溶性四氮唑(water-soluble

3、tetrazolium，WST-1)法測(cè)定血清抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)的活力，并用免疫組化測(cè)定骨組織中HO-1的表達(dá)變化，從而探討姜黃素對(duì)去卵巢大鼠骨丟失的作用及其機(jī)理，為尋找安全有效的防治方法提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1動(dòng)物分組和PMOP動(dòng)物模型制備
　　清潔級(jí)3月齡雌性Sprague/Dawley大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只:①假手術(shù)(Sham)組、②卵

4、巢切除(OVX)組、③卵巢切除+戊酸雌二醇(OVX+E)組、④卵巢切除+高劑量姜黃素(OVX+HC)組、⑤卵巢切除+低劑量姜黃素(OVX+LC)組。大鼠經(jīng)10％水合氯醛（0.35ml/100g體重）腹腔麻醉后，無(wú)菌條件下，經(jīng)腰背部正中縱行切口進(jìn)入腹腔背側(cè)，切除②-⑤組大鼠的雙側(cè)卵巢，①組大鼠僅切除雙側(cè)卵巢下方少許脂肪組織，重量約與卵巢相同。自去卵巢術(shù)后7天起，各組大鼠分別進(jìn)行灌胃給藥，共12周。OVX+E組給予戊酸雌二醇0.833mg/

5、kg·d，OVX+HC組給予姜黃素200mg/kg·d灌胃，OVX+LC組給予姜黃素100mg/kg·d灌胃，Sham組及OVX組以10ml/Kg體重給予相應(yīng)體積的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液，每日1次。給藥劑量每周按體重校正1次。
　　2雙能X線吸收法測(cè)量骨密度(bone mineral density, BMD)
　　用藥12周后，分別取各組大鼠置于Osteocore3型雙能X線骨密度儀上，通過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)中心動(dòng)物軟件，測(cè)量

6、每只大鼠腰椎及雙側(cè)股骨BMD，BMD值用g/cm2表示。
　　3蘇木素-伊紅（HE）染色及免疫組織化學(xué)染色、血清SOD、MDA水平測(cè)定
　　大鼠心臟取血2ml后處死，立即取左側(cè)股骨，進(jìn)行HE染色、免疫組織化學(xué)染色及觀察。分別用TBA法及WST-1法測(cè)定血清MDA及SOD水平。
　　4結(jié)果判定與圖像分析統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。所測(cè)數(shù)值均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±S）表示，方差齊性檢驗(yàn)

7、采用Levene法，各組間變量比較采用完全隨機(jī)的單因素方差分析，并采用SNK法進(jìn)行兩兩比較，相關(guān)性分析用pearson積差相關(guān)分析。P＜0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1各組大鼠BMD比較
　　與Sham組相比，OVX組及OVX+LC組股骨、腰椎BMD下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.05)，OVX+E組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，OVX+HC組股骨BMD降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

8、0.05)，腰椎BMD差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與OVX組相比，OVX+E組及OVX+HC、OVX+LC組大鼠股骨、腰椎BMD增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05; P＜0.05; P＜0.05);與OVX+E組相比，OVX+LC組大鼠股骨、腰椎BMD降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而OVX+HC組大鼠股骨、腰椎BMD差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;與OVX+LC組相比，OVX+HC組大鼠股骨、腰椎BMD增加，差異有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2骨組織形態(tài)觀察
　　(1)Sham組:骨小梁呈縱向排列，相互連接呈網(wǎng)狀，排列密集、有規(guī)則，骨小梁數(shù)目多，間距小，皮質(zhì)骨致密。(2)OVX組:骨小梁斷裂，排列稀疏，無(wú)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)大量骨小梁盲端，小梁壁寬度變窄，間距增寬，皮質(zhì)骨變薄。(3)OVX+E組大鼠骨組織形態(tài)與Sham組相似，OVX+HC組及OVX+LC組較OVX組在骨小梁的數(shù)量、寬度、長(zhǎng)度、分布以及連續(xù)性上都有大幅度改善，且OVX+H

10、C組改善更明顯。
　　3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果觀察
　　HO-1蛋白在骨組織中的表達(dá)特征:HO-1陽(yáng)性信號(hào)主要位于骨小梁周邊的成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及骨髓中。Sham組及OVX+E組僅見(jiàn)少量HO-1蛋白表達(dá)，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與Sham組及OVX+E組相比，OVX組HO-1蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05);與Sham組、OVX+E組及OVX組相比，OVX+HC組及OVX+LC組HO-1蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05

11、; P＜0.05)，與OVX+LC組相比，OVX+HC組HO-1表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　4血清SOD、MDA水平結(jié)果
　　與Sham組相比，OVX組、OVX+HC組及OVX+LC組血清MDA含量升高，SOD活力降低(P＜0.05;P＜0.05; P＜0.05)，OVX+E組大鼠血清MDA、SOD水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;與OVX組相比，OVX+E組、OVX+HC組及OVX+LC組大鼠血清MDA降低，SOD

12、活力升高（P＜0.05;P＜0.05; P＜0.05);與OVX+E組相比，OVX+LC組大鼠血清MDA含量升高，SOD活力降低(P＜0.05)，OVX+HC組大鼠血清MDA含量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），SOD活性降低(P＜0.05)。與OVX+ LC組相比，OVX+HC組大鼠血清MDA降低，SOD活性升高（P＜0.05）。
　　5相關(guān)性分析
　　各組大鼠血清中SOD活性與左股骨、腰椎BMD呈正相關(guān)(r=0.884，

13、P＜0.01;r=0.890，P＜0.01)，MDA含量與左股骨、腰椎BMD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.889,P＜0.01;r=-0.881,P＜0.01)。
　　Sham組、OVX組及OVX+E組大鼠骨組織中，HO-1表達(dá)水平與左股骨BMD無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.292，P＞0.05;r=0.592，P＞0.05;r=0.577，P＞0.05)，而OVX+HC組以及OVX+LC組大鼠骨組織中，HO-1表達(dá)與左股骨BMD呈正相關(guān)(r=0.