姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對人肝癌細(xì)胞HepG2中Survivin、Livin蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是我國及全世界常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，而中國是全世界擁有最多新發(fā)肝癌的國家，占全球新發(fā)病例的一半以上。國內(nèi)有文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)，目前肝癌的死亡率居我國大陸地區(qū)所有腫瘤死亡率的第2位，且近年來呈明顯上升趨勢。由于肝癌早期癥狀不典型，且病情進(jìn)展迅速，一般發(fā)現(xiàn)時(shí)多數(shù)患者已處于疾病的中、晚期，失去根治性手術(shù)切除的機(jī)會(huì)。肝癌惡性程度較高，術(shù)后五年生存率僅15％-40％，且有60％-8

2、0％左右的患者在兩年內(nèi)復(fù)發(fā)。
　　Survivin蛋白及其mRNA高表達(dá)于人類大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，Survivin具有抗細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂、促進(jìn)細(xì)胞增殖及參與血管的形成等作用。Survivin在肝癌組織和幾乎所有的肝癌細(xì)胞株中高水平表達(dá)，而在癌旁組織及肝硬化組織中未發(fā)現(xiàn)。而且Survivin的高表達(dá)與肝細(xì)胞癌門靜脈癌栓的發(fā)生、術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率密切相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，抑制Survivin蛋白及其mRNA的表達(dá)，能夠明顯抑制腫瘤細(xì)

3、胞的生長和增殖，提高腫瘤的治療效果。Livin蛋白在成人大多數(shù)正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)，而在多數(shù)惡性腫瘤組織中高表達(dá)，同時(shí)該蛋白的高表達(dá)與腫瘤的分化程度、侵襲、轉(zhuǎn)移過程等密切相關(guān)。通過肝細(xì)胞癌組織與癌旁組織和正常肝組織的比較研究，Livin蛋白在肝癌組織中表達(dá)率顯著高于非腫瘤組織。所以Livin和Survivin蛋白的高表達(dá)對肝癌的發(fā)生、血管浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后等具有重要的影響作用。
　　姜黃素(Curcumin，CUR)、去甲

4、氧基姜黃素(Demethoxycurcumin，DMC)、雙去甲氧基姜黃素(Bisdemethoxycurcumin，BDMC)是從姜科植物姜黃的根莖中提取的有色色素，其作為傳統(tǒng)中藥成分使用在我國具有悠久的歷史。姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素具有抗氧化活性、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗肝纖維化、抗腫瘤等藥理作用，由于其良好的抗腫瘤作用，西方醫(yī)學(xué)對姜黃素類物質(zhì)的關(guān)注和研究越來越多。
　　近年研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙

5、去甲氧基姜黃素能夠抑制乳腺癌、胃癌、腸癌、肝癌、胰腺癌等腫瘤細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，可能與下調(diào)Survivin蛋白及其mRNA的表達(dá)有關(guān)，但其機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。而關(guān)于姜黃素及其衍生物對肝細(xì)胞癌中Survivin、Livin的調(diào)節(jié)作用少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過研究姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對肝癌細(xì)胞HepG2中Livin、Survivin蛋白表達(dá)的影響，初步探討姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素促進(jìn)肝癌細(xì)胞Hep

6、G2凋亡的可能作用機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)采用體外常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2的方法，用相同濃度（20μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素作用于HepG2細(xì)胞24h后，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞的凋亡變化情況;用姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素三種藥物分別以不同濃度（20、40μmol/L）作用于HepG2細(xì)胞24h后，采用Western-Blot方法檢測肝細(xì)胞癌HepG2中Livin、Surviv

7、in蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1.FCM檢測結(jié)果顯示:經(jīng)姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素處理的HepG2細(xì)胞，細(xì)胞凋亡率明顯增加(P＜0.05)，雙去甲氧基姜黃素的作用效果強(qiáng)于姜黃素和去甲氧基姜黃素(P＜0.05)，姜黃素和去甲氧基姜黃素之間比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.Western-Blot方法檢測結(jié)果顯示:不同濃度（20、40μmol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素作用于人肝細(xì)胞癌

8、HepG2細(xì)胞后， Livin、Survivin蛋白的表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，且隨著濃度的增加Livin、Survivin蛋白表達(dá)水平逐漸下降(P＜0.05)。
　　3.分別比較相同濃度（20umol/L和40umol/L）的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素三者之間對肝細(xì)胞癌HepG2細(xì)胞中Livin、Survivin蛋白表達(dá)影響的強(qiáng)弱，其結(jié)果均為雙去甲氧基姜黃素＞去甲氧基姜黃素＞姜黃素(P＜0.05)。
　　結(jié)論