姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對人肝癌細(xì)胞HepG2中uPA系統(tǒng)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌(HepatocellularCarcinoma，HCC)是世界上排名第五位的惡性腫瘤，列全部癌癥死因第三位，我國癌癥死因的第二位。我國的肝癌發(fā)病率為全世界最高，達(dá)98.9/100，000。肝癌因其發(fā)病率的逐漸增長，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病之一。全世界每年約有62.5萬肝癌新發(fā)病例，占全部惡性腫瘤的4％。每年死于肝癌的人數(shù)全世界共約60萬人（與新發(fā)病例總數(shù)相當(dāng)），其中40％分布在我國。肝癌惡性程度較高，起病隱匿，早

2、期不易察覺，易發(fā)生轉(zhuǎn)移。當(dāng)出現(xiàn)典型臨床表現(xiàn)的時(shí)候基本屬于中晚期，預(yù)后極差。自然生存期不超過半年。
　　 腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，離不開細(xì)胞外基質(zhì)（如層粘連蛋白、纖維連接蛋白、蛋白多糖以及Ⅳ型膠原等）的降解。尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-typeplasminogenactivator,uPA)屬于蛋白水解酶類，可降解細(xì)胞外基質(zhì)。uPA系統(tǒng)與細(xì)胞外基質(zhì)的降解密切相關(guān)，此系統(tǒng)包括uPA，uPA的受體，即尿激酶型纖溶酶原激活劑受

3、體(urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor,uPAR)和其抑制劑人纖溶酶原激活物抑制因子1（originalpeoplefibrinolyticenzymeactivatorsinhibitoryfactor1,PAI-1）等。uPA廣泛存在于正常細(xì)胞和腫瘤的細(xì)胞膜上，是一種絲氨酸蛋白酶，通過與細(xì)胞膜上的特異性受體uPAR結(jié)合而發(fā)揮作用?？杉せ罾w溶酶原成為纖溶酶，亦可激活具有潛在活性的膠原酶

4、，可介導(dǎo)纖維蛋白降解，瓦解細(xì)胞外基質(zhì)以及基底膜，從而促使腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移。
　　 uPA的抑制劑PAI-1可以調(diào)控uPA的活性。在腫瘤細(xì)胞中PAI-1的表達(dá)量高于正常細(xì)胞，在侵襲力強(qiáng)的細(xì)胞中，其表達(dá)量也高于侵襲力低的細(xì)胞。其在腫瘤生物學(xué)中的作用目前尚不明確。可能對腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移起抑制作用，也有可能是腫瘤細(xì)胞防止自身降解的保護(hù)劑。另外，PAI-1和uPA以及uPAR在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起到相互協(xié)調(diào)的作用。
　　 姜黃素是植物姜

5、黃的提取物。目前，姜黃素在抑制腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移的作用越來越受到關(guān)注。姜黃又稱黃姜，為姜黃科姜黃屬植物，在亞洲一些國家稱為turmeric或kunyit，其根莖磨成粉末為咖喱的主要香料之一。姜黃素是姜黃粉末的主要成分。植物姜黃中可提取姜黃素和兩種姜黃素的衍生物——去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素。這三種物質(zhì)具有類似的抗腫瘤作用。研究表明，用姜黃素作用于人乳腺癌細(xì)胞，結(jié)果顯示可以使uPA及其受體uPAR蛋白的表達(dá)受到抑制，而uPA的抑制物P

6、AI-1蛋白的表達(dá)則受到上調(diào)，且呈濃度依賴性。而關(guān)于姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對人肝癌細(xì)胞中uPA及其受體uPAR、抑制物PAI-1三種蛋白質(zhì)的表達(dá)的影響目前少有研究。本實(shí)驗(yàn)初步探討姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素對肝癌細(xì)胞HepG2中uPA系統(tǒng)蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法:常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2;用不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素（10、20、40、80μmol/L）處理He

7、pG2細(xì)胞24h、48h、72h后，MTT法檢測細(xì)胞的增殖;Western-Blot方法測定不同濃度的姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素(20、40μmol/L)分別作用于HepG2細(xì)胞24h后，HepG2細(xì)胞中uPA、uPAR、PAI-1蛋白表達(dá)的變化，以及相同濃度（60μmol/L）姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素分別刺激肝癌細(xì)胞株HepG224小時(shí)，比較三者對該細(xì)胞中uPA系統(tǒng)各蛋白表達(dá)影響的作用強(qiáng)弱。
　　

8、 結(jié)果:姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素均可抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖，且呈時(shí)間、濃度依賴性(P＜0.05)。40μmol/L的去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素作用于人肝癌細(xì)胞HepG248小時(shí)，抑制率高于姜黃素組(P＜0.05)，72小時(shí)雙去甲氧基姜黃素的抑制率高于姜黃素組(P＜0.05)。
　　 姜黃素、去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素均可抑制HepG2細(xì)胞中uPA、uPAR蛋白的表達(dá)，并可上調(diào)PAI-1蛋白的表

9、達(dá)。且呈濃度相關(guān)性(P＜0.05)。其中對uPA蛋白抑制作用雙去甲氧基姜黃素強(qiáng)于去甲氧基姜黃素和姜黃素(P＜0.05)，對uPAR蛋白的抑制作用順序?yàn)殡p去甲氧基姜黃素依次強(qiáng)于去甲氧基姜黃素和姜黃素(P＜0.05)。對PAI-1的上調(diào)作用去甲氧基姜黃素強(qiáng)于雙去甲氧基姜黃素和姜黃素(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素均可抑制人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖。其中去甲氧基姜黃素和雙去甲氧基姜黃素的增殖抑制