人參皂甘甙Rh2聯(lián)合化療對T細(xì)胞淋巴瘤協(xié)同增效的分子機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 通過研究人參皂甙Rh2（G-Rh2）對T淋巴細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(TcellNon-Hodgkinlymphoma，T-NHL)細(xì)胞系HUT-78增殖、凋亡、血管形成及免疫調(diào)節(jié)的影響，并聯(lián)合蛋白酶體抑制劑硼替佐咪(BTZ)及氟達(dá)拉濱(FLU)方案對T-NHL的體外抗腫瘤作用進(jìn)行研究，探討人參皂甙Rh2與BTZ和FLU聯(lián)合治療對T-NHL細(xì)胞及其微環(huán)境的影響，闡明人參皂甙Rh2能否增強(qiáng)T-NHL細(xì)胞對BTZ和FLU聯(lián)合

2、化療的敏感性，并從信號轉(zhuǎn)導(dǎo)角度探討其可能的分子機(jī)制，為T-NHL治療提供新的治療思路和理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.通過MTT法測定G-Rh2、BTZ、FLU單藥作用于T細(xì)胞淋巴細(xì)胞細(xì)胞系HUT-78的半數(shù)抑制濃度IC50，以獲取后續(xù)實(shí)驗(yàn)的適宜藥物濃度。
　　 2.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測G-Rh2、BTZ、FLU單藥及聯(lián)合應(yīng)用對HUT-78細(xì)胞周期分布的影響。
　　 3.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測G-Rh2、B

3、TZ、FLU單藥及聯(lián)合應(yīng)用對HUT-78細(xì)胞凋亡的影響。
　　 4.通過Westernblot檢測G-Rh2、BTZ、FLU單藥及聯(lián)合應(yīng)用對HUT-78細(xì)胞cleavedcaspase-3、Bcl-XL、Bax、P65蛋白的表達(dá)影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT實(shí)驗(yàn)顯示:BTZ、FLU單藥及聯(lián)合應(yīng)用都有較強(qiáng)的細(xì)胞增殖抑制作用，且聯(lián)合應(yīng)用該作用更為明顯，而G-Rh2單藥作用于HUT-78細(xì)胞系抑制細(xì)胞增殖作用不

4、明顯，但與BTZ、FLU聯(lián)合應(yīng)用時(shí)能增強(qiáng)化療藥物的細(xì)胞增殖抑制作用。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期:G-Rh2的對HUT-78細(xì)胞系細(xì)胞周期的影響沒有具體的時(shí)相性，但FLU主要使該細(xì)胞停滯在G0-G1期，而BTZ主要使細(xì)胞停滯在S期。
　　 3.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡:G-Rh2、BTZ、FLU均有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，且聯(lián)合用藥的作用更為顯著。
　　 4.Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示:G-Rh2、BTZ、F

5、LU單藥及聯(lián)合均有促進(jìn)HUT-78細(xì)胞系促凋亡蛋白表達(dá)，抑制抗凋亡蛋白表達(dá)的作用，且G-Rh2能夠促進(jìn)化療藥物的促凋亡作用。
　　 5.Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示:G-Rh2、BTZ、FLU均能抑制NF-κB途徑的活化，且三藥聯(lián)合時(shí)這種作用最強(qiáng)。
　　 結(jié)論:
　　 1.FLU、BTZ兩藥均有濃度和時(shí)間依賴性，且FLU這種趨勢更明顯;G-RH2本身抑制細(xì)胞增殖的作用不明顯，但與化療聯(lián)合后能明顯提高腫瘤細(xì)胞對化

6、療藥的敏感性;FLU+BTZ的協(xié)同作用不明顯，但與G-RH2聯(lián)合后協(xié)同作用明顯加強(qiáng)。
　　 2.細(xì)胞周期方面:FLU把腫瘤細(xì)胞主要抑制在G0/G1期，細(xì)胞屬于靜止期，細(xì)胞增殖減慢;BTZ主要使腫瘤細(xì)胞停止在S期，細(xì)胞處于DNA合成期;藥物對細(xì)胞周期的作用成濃度依賴性;但G-Rh2為細(xì)胞周期非依賴性藥物。
　　 3.細(xì)胞凋亡方面:FLU對于細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于誘導(dǎo)凋亡的作用;BTZ的誘導(dǎo)凋亡作用更為突出;G-Rh2單藥促