有機(jī)磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討有機(jī)磷對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用，初步觀察卡托普利對(duì)有機(jī)磷血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用的保護(hù)作用以及作用機(jī)制。
　　方法：
　　一、離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)。采用文獻(xiàn)上的方法制備大鼠胸主動(dòng)脈的血管環(huán)，將所制得的血管環(huán)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要分成不同的組別：不同濃度敵百蟲組（3.63×10－4~36.3μmol/L）、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶組、敵百蟲（3.63μmol/L）+左旋精氨酸組、敵百蟲（3.63μmol/L）+阿

2、托品組。孵育0.5h，分別檢測(cè)乙酰膽堿誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及硝普鈉誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及血管組織的NO、MDA、SOD等生化指標(biāo)的變化。為了研究卡托普利對(duì)有機(jī)磷引起的毒性作用的保護(hù)作用，將血管環(huán)分別與敵百蟲（3.63μmol/L）、卡托普利（10μmol/L）、卡托普利（0.1、1、10μmol/L）+敵百蟲（3.63μmol/L）、敵百蟲（3.63μmol/L）+超氧化物歧化酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶

3、、敵百蟲（3.63μmol/L）+依那普利拉、敵百蟲（3.63μmol/L）+卡托普利（10μmol/L）+巰基蛋白酶抑制劑共孵育0.5h，分別檢測(cè)乙酰膽堿誘導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及硝普鈉誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)以及血管組織的NO、MDA、SOD等生化指標(biāo)的變化。
　　二、體外培養(yǎng)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。體外培養(yǎng)HVUEVC-304細(xì)胞，為了研究有機(jī)磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用機(jī)制，將培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分成不同組別：不同濃度敵百蟲（3.

4、63×10－4~36.3μmol/L）組、組胺組、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶組，共孵育0.5h后，用白蛋白標(biāo)記法檢測(cè)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的單層通透性，用噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞活性，用試劑盒測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中NO、MDA、SOD等生化指標(biāo)的變化。為了研究卡托普利對(duì)有機(jī)磷引起的毒性作用的保護(hù)作用，HVUEVC-304分別與敵百蟲（3.63μmol/L）、卡托普利（10μmol/L）、卡托普利（0.1、1、10μmol/L）

5、+敵百蟲（3.63μmol/L）、組胺、敵百蟲（3.63μmol/L）+超氧化物歧化酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+過氧化氫酶、敵百蟲（3.63μmol/L）+依那普利拉、敵百蟲（3.63μmol/L）+卡托普利（10μmol/L）+巰基蛋白酶抑制劑（PHMB）共孵育0.5h，分別檢測(cè)HVUEVC-304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的單層通透性、內(nèi)皮細(xì)胞活性以及細(xì)胞培養(yǎng)液中NO、MDA、SOD等生化指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：敵百蟲（3.63

6、×10－2~36.3μmol/L）與血管環(huán)共孵育0.5h，敵百蟲能夠顯著性抑制ACh誘導(dǎo)的EDR反應(yīng)，且抑制效應(yīng)呈現(xiàn)出劑量依賴性；敵百蟲不能夠抑制SNP引起的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)。敵百蟲會(huì)導(dǎo)致血管組織中NO含量下降、MDA含量上升以及SOD活性下降?？ㄍ衅绽?.1~10μmol/L）能夠?qū)嘲傧x引起的EDR反應(yīng)產(chǎn)生保護(hù)作用，且表現(xiàn)出濃度依賴性，而對(duì)SNP誘導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)沒有影響。卡托普利同時(shí)能夠?qū)嘲傧x引起的NO含量下降、M

7、DA含量上升以及 SOD活性下降產(chǎn)生保護(hù)作用。敵百蟲（3.63×10－2~36.3μmol/L）與HVUEVC-304細(xì)胞共孵育0.5h，顯著性增加了單層內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，降低了內(nèi)皮細(xì)胞活性，細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量下降、MDA含量上升以及 SOD活性下降?？ㄍ衅绽?.1~10μmol/L）能夠減輕敵百蟲引起的單層內(nèi)皮細(xì)胞通透性增高，內(nèi)皮細(xì)胞活性降低，細(xì)胞培養(yǎng)液中NO含量下降、MDA含量上升以及SOD活性下降，且該作用呈現(xiàn)劑量依賴性。超氧