VEGF對低糖性腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用研究.pdf

1、低血糖是糖尿病患者采用胰島素強(qiáng)化治療時(shí)常見而嚴(yán)重的并發(fā)癥。臨床研究表明，低血糖誘發(fā)的腦水腫是低血糖性腦損傷的始動(dòng)過程。腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障重要組成成分，位于相鄰內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接通過限制小分子物質(zhì)通過進(jìn)而維持腦組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。但是，低血糖是否通過破壞緊密連接來影響腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能引起腦水腫的發(fā)生迄今還沒有被研究。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），作為調(diào)節(jié)血管

2、功能的一個(gè)潛在因子，在腦缺血中具有保護(hù)作用已經(jīng)被證實(shí)，并且還能促進(jìn)神經(jīng)元的存活及突觸的生長。這些報(bào)道促使我們研究VEGF對低血糖性腦內(nèi)皮細(xì)胞功能是否具有保護(hù)作用。
　　我們采用永生化的小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞作為研究對象，體外模擬血腦屏障。首先，研究低糖條件對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響。通過采用熒光素鈉（Na-F）檢測暴露于低糖條件的跨內(nèi)皮細(xì)胞的通透性；Western blot和細(xì)胞免疫熒光（IF）檢測緊密連接相關(guān)蛋白claudin-5，

3、ZO-1和occludin的表達(dá)變化和分布改變；乳酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)（LDH實(shí)驗(yàn)）檢測低糖對內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用。結(jié)果顯示，與正常葡萄糖組相比，低糖條件組（0、0.5、1 mM）的跨內(nèi)皮細(xì)胞通透性均明顯升高，同時(shí)，緊密連接蛋白claudin-5的表達(dá)也相應(yīng)下降。當(dāng)較長時(shí)間（24 h）較低糖濃度（0、0.5 mM）時(shí)，腦內(nèi)皮細(xì)胞毒性增加。
　　進(jìn)而，我們采用ELISA檢測低糖條件下24 h后培養(yǎng)基中的VEGF的分泌量，發(fā)現(xiàn)低糖條件組中分泌的

4、VEGF含量比正常葡萄糖條件組中高。最后，通過外加VEGF研究低糖條件下VEGF對腦內(nèi)皮細(xì)胞是否有保護(hù)作用，我們檢測了低糖和VEGF共存條件下跨內(nèi)皮細(xì)胞通透性、緊密連接相關(guān)蛋白以及細(xì)胞毒性的變化。另外，我們還檢測了轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖的主要蛋白Glut-1和反映細(xì)胞凋亡程度的主要指標(biāo)Bcl-2的表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與低糖組相比，低糖和VEGF共存條件下跨內(nèi)皮細(xì)胞通透性降低、claudin-5表達(dá)相應(yīng)增加以及內(nèi)皮細(xì)胞的毒性顯著下降。另外，Glu