幾種氨基糖對受損心肌細胞和心肌組織的保護作用.pdf

1、心臟?。╤eart disease）不論從形成機理還是從危害程度上分類，其對心臟的最基本傷害均是引起不同程度的心肌細胞損傷。
　　殼聚糖是甲殼素脫乙酰后得到的高分子氨基多糖，具有良好的相容性、生物功能性、安全性和可降解性，被廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化工等領域。隨著殼聚糖改性修飾的深入和在醫(yī)藥、生物技術領域研究的深入，低分子量殼聚糖衍生物的功能性和安全性評價成為一個重要的研究內(nèi)容。
　　硫酸軟骨素是一種糖胺聚糖，易溶于水，對維持

2、細胞環(huán)境的相對穩(wěn)定和正常生理功能起到重要作用。長時間用藥的經(jīng)驗顯示大分子的硫酸軟骨素作用效果比較緩慢。將硫酸軟骨素降解得小分子硫酸軟骨素，對其進行功能性評價，比較其與大分子硫酸軟骨素的作用效果，具有重要的研究意義。
　　本課題以殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素為基本材料，通過酶降解法，純化得到低分子量殼聚糖衍生物和低分子量硫酸軟骨素，開展了理化性質(zhì)測定，在細胞水平和動物水平評價了殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素對受損心肌細胞和組織的保護作用，為殼

3、聚糖衍生物和硫酸軟骨素的進一步開發(fā)提供了實驗依據(jù)。
　　本實驗取得了以下幾個方面的成果和進展：
　　1.將羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素純化后分別經(jīng)殼聚糖酶和硫酸軟骨素酶降解，制備了羧甲基殼寡糖、中分子硫酸軟骨素和小分子硫酸軟骨素。
　　2.對七種氨基糖（N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼聚糖、羧甲基殼寡糖、硫酸軟骨素）進行理化性質(zhì)的測定。
　　3.采用顯微觀察法和MTT法，

4、測定上述7種氨基糖對于正常H9c2心肌細胞的作用，表明7種氨基糖均無細胞毒性，且不同程度地促進H9c2細胞的生長和增殖，N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度均為50μg?mL-1，羧甲基殼聚糖的最佳作用濃度為100μg?mL-1，小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，為氨基糖的后續(xù)實驗應用提供了理論支持。
　　4.建立體外培養(yǎng)的H9c2心肌細胞損傷模型，評

5、價7種氨基糖對受損心肌細胞的作用。通過顯微觀察法和MTT法結果顯示，7種糖對于受損心肌細胞的生長有良好的促進作用，其中小分子硫酸軟骨素和羧甲基殼寡糖促進受損心肌細胞的生長和增殖的效果較為突出。小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度為50μg?mL-1。
　　5.給予異丙腎上腺素復制大鼠心肌梗塞模型，在此基礎上評價羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素對受損心肌的保護作用。給心肌損傷的大鼠灌胃高、中

6、、低劑量的羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素，于連續(xù)灌胃7d和14d時取血，檢測、比較血清中心臟標志酶（乳酸脫氫酶、肌酸激酶、谷草轉氨酶）的含量，并制作組織切片進行組織病理觀察。通過血清標志酶的檢測發(fā)現(xiàn)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素作用效果相近，同劑量的兩種糖進行差異性分析，差異不顯著（P＞0.05）。在用糖劑量上，7d時中劑量組與高劑量組初步表現(xiàn)出用糖治療的優(yōu)越性（中劑量組、高劑量組與ISO損傷對照組比較，具有顯著性差異P＜0.01）；1

7、4d時，高劑量組基本恢復正常（高劑量組與正常組進行比較，差異不顯著P＞0.05）。組織切片觀察結果與血清標志酶表現(xiàn)結果一致。證明了兩種糖能夠促進受損心肌的修復。
　　6.給予異丙腎上腺素法復制大鼠心肌梗塞模型，評價不同分子量硫酸軟骨素對受損心肌的保護作用。血清標志酶含量檢測結果表明，小分子硫酸軟骨素和中分子硫酸軟骨素能明顯促進受損心肌的修復，尤其是小分子硫酸軟骨素組作用效果最突出：將各給糖組與ISO損傷對照組進行差異性比較，7d時