幾種氨基糖對受損心肌細(xì)胞和心肌組織的保護(hù)作用.pdf

1、心臟病（heart disease）不論從形成機(jī)理還是從危害程度上分類，其對心臟的最基本傷害均是引起不同程度的心肌細(xì)胞損傷。
　　殼聚糖是甲殼素脫乙酰后得到的高分子氨基多糖，具有良好的相容性、生物功能性、安全性和可降解性，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域。隨著殼聚糖改性修飾的深入和在醫(yī)藥、生物技術(shù)領(lǐng)域研究的深入，低分子量殼聚糖衍生物的功能性和安全性評價成為一個重要的研究內(nèi)容。
　　硫酸軟骨素是一種糖胺聚糖，易溶于水，對維持

2、細(xì)胞環(huán)境的相對穩(wěn)定和正常生理功能起到重要作用。長時間用藥的經(jīng)驗顯示大分子的硫酸軟骨素作用效果比較緩慢。將硫酸軟骨素降解得小分子硫酸軟骨素，對其進(jìn)行功能性評價，比較其與大分子硫酸軟骨素的作用效果，具有重要的研究意義。
　　本課題以殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素為基本材料，通過酶降解法，純化得到低分子量殼聚糖衍生物和低分子量硫酸軟骨素，開展了理化性質(zhì)測定，在細(xì)胞水平和動物水平評價了殼聚糖衍生物和硫酸軟骨素對受損心肌細(xì)胞和組織的保護(hù)作用，為殼

3、聚糖衍生物和硫酸軟骨素的進(jìn)一步開發(fā)提供了實驗依據(jù)。
　　本實驗取得了以下幾個方面的成果和進(jìn)展：
　　1.將羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素純化后分別經(jīng)殼聚糖酶和硫酸軟骨素酶降解，制備了羧甲基殼寡糖、中分子硫酸軟骨素和小分子硫酸軟骨素。
　　2.對七種氨基糖（N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼聚糖、羧甲基殼寡糖、硫酸軟骨素）進(jìn)行理化性質(zhì)的測定。
　　3.采用顯微觀察法和MTT法，

4、測定上述7種氨基糖對于正常H9c2心肌細(xì)胞的作用，表明7種氨基糖均無細(xì)胞毒性，且不同程度地促進(jìn)H9c2細(xì)胞的生長和增殖，N-乙酰氨基葡萄糖、磺酸化殼寡糖、低脫乙酰度殼寡糖、高脫乙酰度殼寡糖、羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度均為50μg?mL-1，羧甲基殼聚糖的最佳作用濃度為100μg?mL-1，小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，為氨基糖的后續(xù)實驗應(yīng)用提供了理論支持。
　　4.建立體外培養(yǎng)的H9c2心肌細(xì)胞損傷模型，評

5、價7種氨基糖對受損心肌細(xì)胞的作用。通過顯微觀察法和MTT法結(jié)果顯示，7種糖對于受損心肌細(xì)胞的生長有良好的促進(jìn)作用，其中小分子硫酸軟骨素和羧甲基殼寡糖促進(jìn)受損心肌細(xì)胞的生長和增殖的效果較為突出。小分子硫酸軟骨素的最佳作用濃度為200μg?mL-1，羧甲基殼寡糖的最佳作用濃度為50μg?mL-1。
　　5.給予異丙腎上腺素復(fù)制大鼠心肌梗塞模型，在此基礎(chǔ)上評價羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素對受損心肌的保護(hù)作用。給心肌損傷的大鼠灌胃高、中

6、、低劑量的羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素，于連續(xù)灌胃7d和14d時取血，檢測、比較血清中心臟標(biāo)志酶（乳酸脫氫酶、肌酸激酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶）的含量，并制作組織切片進(jìn)行組織病理觀察。通過血清標(biāo)志酶的檢測發(fā)現(xiàn)羧甲基殼寡糖和小分子硫酸軟骨素作用效果相近，同劑量的兩種糖進(jìn)行差異性分析，差異不顯著（P＞0.05）。在用糖劑量上，7d時中劑量組與高劑量組初步表現(xiàn)出用糖治療的優(yōu)越性（中劑量組、高劑量組與ISO損傷對照組比較，具有顯著性差異P＜0.01）；1

7、4d時，高劑量組基本恢復(fù)正常（高劑量組與正常組進(jìn)行比較，差異不顯著P＞0.05）。組織切片觀察結(jié)果與血清標(biāo)志酶表現(xiàn)結(jié)果一致。證明了兩種糖能夠促進(jìn)受損心肌的修復(fù)。
　　6.給予異丙腎上腺素法復(fù)制大鼠心肌梗塞模型，評價不同分子量硫酸軟骨素對受損心肌的保護(hù)作用。血清標(biāo)志酶含量檢測結(jié)果表明，小分子硫酸軟骨素和中分子硫酸軟骨素能明顯促進(jìn)受損心肌的修復(fù)，尤其是小分子硫酸軟骨素組作用效果最突出：將各給糖組與ISO損傷對照組進(jìn)行差異性比較，7d時