HGF對培養(yǎng)大鼠心肌細胞的保護作用.pdf

1、感染性休克的重要表現(xiàn)之一是心功能降低.近年發(fā)現(xiàn),部分感染性休克患者還存在心肌細胞損傷。已報導(dǎo)在全身性感染動物模型中存在心肌細胞的凋亡。然而,目前調(diào)控心肌細胞凋亡的手段尚有限。 近年來,肝細胞生長因子的抗凋亡作用引起學(xué)者的重視.目前已有一些有關(guān)HGF對再灌注損傷心肌保護作用的研究,然而對HGF的作用機制尚未完全明確.采用過氧化氫誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡模型,有助于探索HGF保護再灌注損傷心肌的信號機制.有報導(dǎo)HNF α可導(dǎo)致心肌細胞凋亡

2、.由于體內(nèi)環(huán)境的復(fù)雜性,體外實驗將有助于確立TNFα在心肌細胞凋亡過程中的地位,以及HGF的潛在價值.通過流式細胞術(shù)、熒光顯微鏡技術(shù)及原位細胞凋亡檢測,本文進行了以下研究： 1.TNFα及放線菌素D誘導(dǎo)新生大鼠心肌細胞凋亡模型的建立方法：單獨使用TNFα(終濃度分別為1、3、5nM)加用放線菌素D(終濃度為0.05μg/ml后),觀察培養(yǎng)新生大鼠的心肌細胞凋亡特性。 結(jié)果：單獨使用TNFα(終濃度分別為1、3、5nM)未

3、能誘導(dǎo)培養(yǎng)新生大鼠的心肌細胞凋亡,加用放線菌素D(終濃度為0.05μg/ml后),TNFα引起培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,并呈現(xiàn)劑量一效應(yīng)關(guān)系,于作用24小時見明顯凋亡細胞群體。 結(jié)論：加用放線菌素D(終濃度為0.05μg/ml后),TNFα引起培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,單獨使用TNFα則不能. 2.HGF對TNFα及放線菌素D作用下的新生大鼠心肌細胞凋亡特性的影響方法:使用HGF(終濃度分別為10,30,100ng/m1)干預(yù)T

4、NFα(終濃度為5nM)加用放線菌素D(終濃度為0.05μg/ml)所致大鼠心肌細胞凋亡模型,并觀察P13K抑制劑LY294002(終濃度20μM)或MAPK抑制劑U0126(終濃度30μM)能否阻斷HGF的作用. 結(jié)果：HGF能夠抑制放線菌素D與TNF α共同作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,并呈現(xiàn)量效關(guān)系.與P13K抑制劑LY294002 (終濃度20μM)共孵育,HGF抑制凋亡的效應(yīng)被阻斷,而加用MAPK抑制劑U0126(終濃

5、度30μM)不能阻斷HGF的作用. 結(jié)果：HGF能夠保護放線菌素D與TNFα共同作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞免于凋亡,且通過P13K傳導(dǎo)途徑發(fā)揮作用. 3.H<,2>O<,2>作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡模型的建立方法:觀察過氧化氫(終濃度分別為1、3、5mM)對培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡特性的影響. 結(jié)果：過氧化氫終濃度能夠誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,并呈現(xiàn)劑量－效應(yīng)關(guān)系,于作用24小時見明顯凋亡細胞群體. 結(jié)論：

6、過氧化氫能夠有效地誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡. 4.HGF對H<,2>O<,2>作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞的凋亡特性的影響及信號機制方法:觀察HGF(終濃度分別為10,30,100ng/ml)能否影響過氧化氫(終濃度為5mM)誘導(dǎo)的培養(yǎng)大鼠心肌細胞的凋亡特性. 結(jié)果：HGF能夠抑制H<,2>O<,2>作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,并呈現(xiàn)量效關(guān)系.與LY294002(終濃度20μM)共孵育,HGF抑制凋亡的效應(yīng)被阻斷,而加用U

7、0126(終濃度30μM)不能阻斷HGF的作用.HGF則在抑制心肌細胞凋亡的同時,增加bc卜2的表達,該作用可被LY294002所阻斷,而U0126則不能. 結(jié)論：HGF能夠抑制H<,2>O<,2>作用下的培養(yǎng)大鼠心肌細胞凋亡,其作用與激活P13K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及增加bcl-2表達有關(guān). 本研究結(jié)果提示,HGF主要通過激活磷脂酰肌醇(3)激酶(P13K)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及增加bcl-2的表達抑制心肌細胞凋亡.本研究為探索在體條件下HG