氧糖剝奪期亞低溫治療對氧糖恢復(fù)后心肌細(xì)胞保護(hù)的研究.pdf

1、研究目的:
　　 通過體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞模型，觀察氧糖剝奪期亞低溫對線粒體結(jié)構(gòu)、呼吸功能的影響，并探討其保護(hù)氧糖恢復(fù)后心肌收縮功能的可能機(jī)制。
　　 材料和方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃槿M：對照組、32℃亞低溫氧糖剝奪-37℃氧糖恢復(fù)組(低溫組)、37℃常溫氧糖剝奪-恢復(fù)組(常溫組)。
　　 2、模型制作
　　 建立體外新生乳鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)模型，通過Galaxy三氣培養(yǎng)箱達(dá)到亞低溫

2、(32℃)、氧糖剝奪(PaO2=0.1％)和氧糖恢復(fù)(PaO2=19.0％)目的。
　　 3、檢測指標(biāo)和方法
　　 在氧糖剝奪前、氧糖恢復(fù)后0hr、0.5hr、1hr、1.5hr、2hr觀察各組心肌細(xì)胞收縮功能變化，計(jì)算收縮頻率和收縮速率；在復(fù)氧0hr、2hr收集細(xì)胞送電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，并提取心肌細(xì)胞線粒體測定線粒體呼吸控制率。
　　 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 采取SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3、。實(shí)驗(yàn)中數(shù)值資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；多組間比較用方差分析，對于不同處理組間的兩兩比較，主要采用LSD-t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用二元變量的相關(guān)分析,P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果
　　 1、培養(yǎng)心肌細(xì)胞密度
　　 60mm培養(yǎng)皿細(xì)胞數(shù)為(3.11±0.07)×106/皿。
　　 2、心肌細(xì)胞純度
　　 培養(yǎng)心肌細(xì)胞純度為(82.64±1.62)％。
　　 3、細(xì)胞收縮頻率和收縮速率的比較

4、>　　 常溫組的收縮速率和收縮頻率在氧糖恢復(fù)后5個檢測時(shí)間點(diǎn)均顯著低于對照組和低溫組(P＜0.05)，低溫組收縮頻率在氧糖恢復(fù)后0hr、0.5hr、1hr低于對照組(P＜0.05)，收縮速率低溫組與對照組之間無顯著差異(P＞0.05).
　　 4、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變、損傷積分和線粒體比表面積的比較
　　 常溫組在氧糖剝奪后0hr超微結(jié)構(gòu)顯示大量線粒體水腫以及肌漿網(wǎng)擴(kuò)張，氧糖恢復(fù)2hr后線粒體和肌漿網(wǎng)損傷有所改善，部分線粒

5、體出現(xiàn)髓鞘樣變。0hr時(shí)損傷積分(HIS)顯著高于對照組、低溫組和2hr時(shí)點(diǎn)(P＜0.05)。氧糖恢復(fù)后0hr、2hr線粒體比表面積均顯著低于對照組(P＜0.05)。低溫組氧糖剝奪后0hr超微結(jié)構(gòu)損傷程度普遍較常溫組減輕，表現(xiàn)為部分線粒體輕微水腫，但與對照組相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。氧糖恢復(fù)后線粒體趨于正常，損傷積分和比表面積與對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 5、線粒體呼吸控制率的比較
　　 常溫組R3、RCR

6、在氧糖剝奪后0hr及氧糖恢復(fù)后2hr顯著低于對照組(P＜0.05)，R4在0hr較對照組顯著增高(P＜0.05)。低溫組RCR在0hr低于對照組，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而R3在0hr低于對照組，R4高于對照組，RCR在2hr仍低于對照組，但均無顯著差異(P＞0.05)。
　　 6、收縮功能、比表面積與RCR的相關(guān)性分析
　　 細(xì)胞收縮頻率、收縮速率與線粒體RCR呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，相關(guān)系數(shù)分別為0.946和0.980；