丁酸鈉對(duì)慶大霉素耳毒性保護(hù)機(jī)制的體內(nèi)研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一：凝膠海綿圓窗龕局部給藥對(duì)正常豚鼠聽力的影響
　　目的：研究經(jīng)手術(shù)，圓窗龕局部放置凝膠海綿的給藥方式對(duì)正常豚鼠的聽性腦干反應(yīng)（Auditory brainstem response ABR）閾值的影響。
　　方法：5只健康紅目白化豚鼠，單耳手術(shù)。顯微鉆打開聽泡,暴露圓窗,取0.3mm3凝膠海綿吸取10ul外淋巴液放置于圓窗龕。術(shù)后立即行ABR檢測(cè)。了解通過手術(shù)，圓窗龕局部放置凝膠海綿的給藥方式對(duì)正常豚鼠ABR閾值的影響

2、。
　　結(jié)果：配對(duì)T檢驗(yàn)：顯示手術(shù)前后ABR的反應(yīng)閾值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了，圓窗龕放置凝膠海綿的給藥方式，因?yàn)楦淖兞苏５膫鲗?dǎo)方式，故而影響了正常豚鼠的ABR反應(yīng)閾值。所以，在接下來的實(shí)驗(yàn)中，ABR閾值的檢測(cè)結(jié)果的比較要考慮到給藥方式本身的影響。
　　實(shí)驗(yàn)二：丁酸鈉圓窗給藥毒性研究
　　目的：了解組蛋白去乙?；敢种苿℉DACi）丁酸鈉（NaB）圓窗龕給藥對(duì)毛細(xì)胞有無毒性作用。

3、
　　方法:5只紅目白化豚鼠單耳手術(shù)，圓窗龕放置0.3mm3凝膠海綿，吸附10ul丁酸鈉NaB(100mg/ml)，局部放置14天。而后行ABR檢測(cè)、基底膜鋪片、掃描電鏡。觀察丁酸鈉對(duì)毛細(xì)胞有無毒性作用。
　　結(jié)果：?jiǎn)我蛩胤讲罘治鲲@示：給藥后ABR閾值與給藥后-給藥前的ABR閾移，與單純手術(shù)組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。全基底膜鋪片顯示：毛細(xì)胞無缺失。掃描電鏡顯示：纖毛形態(tài)正常。
　　結(jié)論：丁酸鈉對(duì)正常豚鼠的聽力

4、，以及毛細(xì)胞無損傷作用。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)圓窗膜龕放置丁酸鈉無毒性損傷作用。故可采用圓窗膜給藥的方式進(jìn)一步驗(yàn)證其是否對(duì)慶大霉素耳毒性具有保護(hù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)三：丁酸鈉對(duì)慶大霉素耳毒性的保護(hù)作用
　　目的：研究丁酸鈉對(duì)慶大霉素耳毒性的保護(hù)作用。
　　方法：10只雄性紅目白化豚鼠，實(shí)驗(yàn)期間，可以自由攝取食物與水。經(jīng)ABR檢測(cè)聽力正常后，雙耳手術(shù)。通過手術(shù)方法向置放在豚鼠右耳圓窗龕內(nèi)約0.3mm3的明膠海綿注入10ul丁酸鈉（100

5、mg/ml）溶液；向置放在豚鼠左耳圓窗龕內(nèi)約0.3mm3的明膠海綿注入10ul外淋巴液作為空白對(duì)照。3天后肌注慶大霉素（200mg/kg.day連續(xù)5天）.休息3天行ABR檢測(cè)、基底膜鋪片染色、掃描電鏡觀察、毛細(xì)胞缺失率計(jì)數(shù)及免疫熒光染色觀察丁酸鈉是否對(duì)慶大霉素耳毒性具有保護(hù)作用。
　　結(jié)果：配對(duì)T檢驗(yàn)顯示：丁酸鈉組ABR閾值與外淋巴液組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01)。基底膜鋪片，鬼筆環(huán)肽染色示：第二轉(zhuǎn)丁酸鈉組毛細(xì)胞缺失較外淋

6、巴液組少。掃描電鏡觀察：對(duì)照組毛細(xì)胞缺失嚴(yán)重，特別是第二、三層外毛細(xì)胞。殘存的毛細(xì)胞纖毛腫脹、倒伏，排列紊亂，失去毛細(xì)胞之間的正常連接。同時(shí)，內(nèi)毛細(xì)胞亦有缺失，伴排列紊亂，纖毛倒伏、腫脹。給予保護(hù)劑丁酸鈉后外毛細(xì)胞缺失明顯減少，纖毛腫脹也較對(duì)照組減輕。毛細(xì)胞缺失率計(jì)數(shù)顯示：對(duì)照組，可見外毛細(xì)胞距頂轉(zhuǎn)約10-40％即有減少，距頂轉(zhuǎn)約55%開始明顯減少，距頂轉(zhuǎn)約70%基本無外毛細(xì)胞存在。內(nèi)毛細(xì)胞距頂轉(zhuǎn)約60%開始減少，70%處明顯減少，80

7、%處基本無內(nèi)毛細(xì)胞存在。給予保護(hù)劑丁酸鈉組可見外毛細(xì)胞距頂轉(zhuǎn)約55-65%即有減少，距頂轉(zhuǎn)約70%開始明顯減少，距頂轉(zhuǎn)約80%基本無外毛細(xì)胞存在。內(nèi)毛細(xì)胞距頂轉(zhuǎn)約70%開始減少，75%處明顯減少，80%處基本無內(nèi)毛細(xì)胞存在。免疫熒光檢測(cè)示:
　　1.正常豚鼠圓窗龕給予丁酸鈉（NaB）作用后，HDAC1的表達(dá)減低。
　　2.隨著慶大霉素作用時(shí)間的延長(zhǎng)，HDAC1的熒光亮度增加，表達(dá)量增高。
　　3.形態(tài)異常的核，HDAC