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文檔簡介
1、實驗一:凝膠海綿圓窗龕局部給藥對正常豚鼠聽力的影響
目的:研究經(jīng)手術(shù),圓窗龕局部放置凝膠海綿的給藥方式對正常豚鼠的聽性腦干反應(Auditory brainstem response ABR)閾值的影響。
方法:5只健康紅目白化豚鼠,單耳手術(shù)。顯微鉆打開聽泡,暴露圓窗,取0.3mm3凝膠海綿吸取10ul外淋巴液放置于圓窗龕。術(shù)后立即行ABR檢測。了解通過手術(shù),圓窗龕局部放置凝膠海綿的給藥方式對正常豚鼠ABR閾值的影響
2、。
結(jié)果:配對T檢驗:顯示手術(shù)前后ABR的反應閾值有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。
結(jié)論:本實驗證實了,圓窗龕放置凝膠海綿的給藥方式,因為改變了正常的傳導方式,故而影響了正常豚鼠的ABR反應閾值。所以,在接下來的實驗中,ABR閾值的檢測結(jié)果的比較要考慮到給藥方式本身的影響。
實驗二:丁酸鈉圓窗給藥毒性研究
目的:了解組蛋白去乙酰化酶抑制劑(HDACi)丁酸鈉(NaB)圓窗龕給藥對毛細胞有無毒性作用。
3、
方法:5只紅目白化豚鼠單耳手術(shù),圓窗龕放置0.3mm3凝膠海綿,吸附10ul丁酸鈉NaB(100mg/ml),局部放置14天。而后行ABR檢測、基底膜鋪片、掃描電鏡。觀察丁酸鈉對毛細胞有無毒性作用。
結(jié)果:單因素方差分析顯示:給藥后ABR閾值與給藥后-給藥前的ABR閾移,與單純手術(shù)組相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。全基底膜鋪片顯示:毛細胞無缺失。掃描電鏡顯示:纖毛形態(tài)正常。
結(jié)論:丁酸鈉對正常豚鼠的聽力
4、,以及毛細胞無損傷作用。本實驗證實圓窗膜龕放置丁酸鈉無毒性損傷作用。故可采用圓窗膜給藥的方式進一步驗證其是否對慶大霉素耳毒性具有保護作用。
實驗三:丁酸鈉對慶大霉素耳毒性的保護作用
目的:研究丁酸鈉對慶大霉素耳毒性的保護作用。
方法:10只雄性紅目白化豚鼠,實驗期間,可以自由攝取食物與水。經(jīng)ABR檢測聽力正常后,雙耳手術(shù)。通過手術(shù)方法向置放在豚鼠右耳圓窗龕內(nèi)約0.3mm3的明膠海綿注入10ul丁酸鈉(100
5、mg/ml)溶液;向置放在豚鼠左耳圓窗龕內(nèi)約0.3mm3的明膠海綿注入10ul外淋巴液作為空白對照。3天后肌注慶大霉素(200mg/kg.day連續(xù)5天).休息3天行ABR檢測、基底膜鋪片染色、掃描電鏡觀察、毛細胞缺失率計數(shù)及免疫熒光染色觀察丁酸鈉是否對慶大霉素耳毒性具有保護作用。
結(jié)果:配對T檢驗顯示:丁酸鈉組ABR閾值與外淋巴液組相比較有統(tǒng)計學差異(P<0.01)?;啄や伷?,鬼筆環(huán)肽染色示:第二轉(zhuǎn)丁酸鈉組毛細胞缺失較外淋
6、巴液組少。掃描電鏡觀察:對照組毛細胞缺失嚴重,特別是第二、三層外毛細胞。殘存的毛細胞纖毛腫脹、倒伏,排列紊亂,失去毛細胞之間的正常連接。同時,內(nèi)毛細胞亦有缺失,伴排列紊亂,纖毛倒伏、腫脹。給予保護劑丁酸鈉后外毛細胞缺失明顯減少,纖毛腫脹也較對照組減輕。毛細胞缺失率計數(shù)顯示:對照組,可見外毛細胞距頂轉(zhuǎn)約10-40%即有減少,距頂轉(zhuǎn)約55%開始明顯減少,距頂轉(zhuǎn)約70%基本無外毛細胞存在。內(nèi)毛細胞距頂轉(zhuǎn)約60%開始減少,70%處明顯減少,80
7、%處基本無內(nèi)毛細胞存在。給予保護劑丁酸鈉組可見外毛細胞距頂轉(zhuǎn)約55-65%即有減少,距頂轉(zhuǎn)約70%開始明顯減少,距頂轉(zhuǎn)約80%基本無外毛細胞存在。內(nèi)毛細胞距頂轉(zhuǎn)約70%開始減少,75%處明顯減少,80%處基本無內(nèi)毛細胞存在。免疫熒光檢測示:
1.正常豚鼠圓窗龕給予丁酸鈉(NaB)作用后,HDAC1的表達減低。
2.隨著慶大霉素作用時間的延長,HDAC1的熒光亮度增加,表達量增高。
3.形態(tài)異常的核,HDAC
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