五羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因多態(tài)性與氟西汀療效及副作用的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、目的：SSRIS類抗抑郁藥物是一類常用的抗抑郁藥物，它通過抑制突觸間隙五羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(5-HTT)對5-HT的重?cái)z取，從而決定突觸后5-HT受體介導(dǎo)信號的量和作用持續(xù)時間，成為腦內(nèi)5-HT遞質(zhì)和外周5-HT效應(yīng)的微調(diào)中心，因此，5-HTT是SSRIS發(fā)揮作用的重要靶標(biāo)，人類5-HTT基因定位于第17號染色體q11-q12.4區(qū)，該基因第2內(nèi)含子區(qū)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性(5-HTT-VNTR)，是一個含17bp的短陣串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性

2、，包括10、12個重復(fù)的常見序列和9個重復(fù)的罕見序列。是SSRIS類抗抑郁藥物發(fā)揮作用時療效和副作用存在個體差異的重要因素。本研究將探討5-HTT第2內(nèi)含子區(qū)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性(5-HTT-VNTR)與中國漢族人群氟西汀抗抑郁臨床療效及不良反應(yīng)的相關(guān)性。 方法采用隨機(jī)調(diào)查研究，連續(xù)跟蹤隨訪監(jiān)測的前瞻性研究方法。對符合美國精神疾病分類標(biāo)準(zhǔn)第4版(DSM-Ⅳ)診斷標(biāo)準(zhǔn)，無嚴(yán)重軀體疾病；無藥物或酒依賴史，既往無躁狂或輕躁狂發(fā)作

3、史，2004年5月-2005年3月期間到中國醫(yī)科大學(xué)門診就診的重度抑郁癥患者82例為研究對象，給予抗抑郁藥物治療(氟西汀)，采用HAMD等心理學(xué)量表及TESS副作用量表對患者進(jìn)行隨訪觀察六周，作為臨床療效及不良反應(yīng)的評定標(biāo)準(zhǔn)。并于結(jié)束時采血，利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)多態(tài)性技術(shù)檢測5-HTT基因5-HTTVN-TR多態(tài)性，進(jìn)行基因型分析。用酚-氯仿法從EDTA抗凝血中提取DNA，取500UL血樣，0.2％的鹽水反復(fù)清洗離心三次，取沉淀加

4、入STE0.4ml、10mg/ml蛋白酶K5ul、10％SDS溶液25ul，37℃消化過夜。過夜后溶液分別加人飽和酚、酚-氯仿、氯仿，混勻萃取雜質(zhì)，離心后取水相，加人3M醋酸鈉，再加冰乙醇沉淀DNA，可見白色絮狀DNA團(tuán)塊，然后再加70％乙醇洗滌，離心后棄上清，自然干燥DNA10min，以100ulTE溶解DNA，-20℃凍存?zhèn)溆?。PCR反應(yīng)條件為20ul反應(yīng)體積含有2.0mmoL/LMgcl2、1×TherophilicDNA聚合酶B

5、uffer、引物濃度200nM、200mol/LdNTPs、1UTaqDNA聚合酶0.2ul和約300ng模板基因組DNA。PCR溫度循環(huán)條件為：95℃預(yù)變性4min；然后以95℃變性1min、60℃復(fù)性45sec、72℃延伸1min，循環(huán)反應(yīng)35次，最后72℃延伸10min。6％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。 主要試劑TaqDNA聚合酶、dNTP均購自大連寶生物試劑公司，瓊脂糖及配制聚丙烯酰胺凝膠用丙烯酰胺購自北京華美公司，引物引

6、用自文獻(xiàn)由大連博瑞德試劑公司生物合成。 上游引物序列：5'-GTCAGTATCACAGGCTGCGAG-3'下游引物序列：5'-TGTTCCTAGTCTTACGCCAGTG-3'主要儀器：KUB-OTA7830型低溫離心機(jī)(日本久保田公司)；LG15-W型高速臺式離心機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠)；PCR擴(kuò)增儀(英國Hybaid公司)；FD-201型水平電泳儀(上海醫(yī)用分析儀器廠)；GDS-8000型凝膠成像儀(英國UVP公司)；HH

7、W21CU600型電熱恒溫水溫儀(上海醫(yī)用分析儀器廠)；振蕩混合儀等。將抑郁癥患者根據(jù)氟西汀藥物療效、有無惡心等副作用進(jìn)行分類，進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。 結(jié)果5-HTTVNTR基因型在各組分布頻率均符合Hardy-Weinberg定律；在藥物治療有療效組和無療效組之間5-HTTVNTR等位基因頻率和基因型沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(基因型χ2=0.730，P＞0.05；等位基因頻率X2=0.303，P＞0.05)；有惡心副作用組和無惡心副作用組之間基