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文檔簡介

1、目的:利用已經(jīng)構(gòu)建好的針對表皮生長因子受體(epidermal growthfactor receptor,EGFR)基因的小于擾RNA(small interference RNA,siRNA)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人卵巢癌SKOV3細胞株后,檢測RNA干擾(RNAinterference,RNAi)對EGFR基因表達及評估細胞對放療敏感性的影響。
　　 方法:應(yīng)用體外構(gòu)建的EGFR小發(fā)卡狀RNA(short hairpinRNA,shR

2、NA)的表達質(zhì)粒,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入SKOV3細胞后行G418篩選陽性克隆。實驗隨機分為陽性RNA干擾組(A組)、陰性RNA干擾組(B組)、空白對照組(C組)。采用RT-PCR、Western Blot技術(shù)檢測EGFRmRNA及其蛋白質(zhì)的表達情況。分別給予不同放射劑量(0、2、4、6、8Gy)照射后,MTT法繪制細胞存活曲線。
　　 結(jié)果:序列特異性shRNA可明顯抑制EGFR基因的表達,EGFRmRNA和蛋白的抑制率分別為77.5

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