DLC1基因?qū)θ寺殉舶┘毎鸒VCAR-3順鉑耐藥性的影響.pdf

1、背景與目的:卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,嚴重危害女性健康。治療以手術為主,化療為輔。目前臨床應用較廣的是以鉑類為主的聯(lián)合化療,由于耐藥和復發(fā)的產(chǎn)生,卵巢癌患者的死亡率居高不下,位居三大惡性腫瘤之首。所以卵巢癌鉑類耐藥產(chǎn)生的機制成為研究熱點?；蛲蛔兓蛉笔嵌喾N惡性腫瘤發(fā)生的根源,有研究發(fā)現(xiàn)肝癌缺失基因1(DLC1)在多種腫瘤中低表達或不表達,通過調(diào)節(jié)黏著斑激酶(FAK)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)等影響腫瘤細胞的凋亡,轉(zhuǎn)

2、染外源性DLC1基因可抑制肝癌細胞的增殖,促進凋亡。已有研究發(fā)現(xiàn)FAK、MAPK蛋白相關信號通路在卵巢癌細胞的增殖和凋亡過程中發(fā)揮重要作用,而其上游調(diào)控因子之一DLC1在卵巢癌中的表達及作用等研究甚少,本實驗用DLC1基因轉(zhuǎn)染該基因表達缺失的人卵巢癌多藥耐藥細胞系OVCAR-3細胞,觀察轉(zhuǎn)染前后卵巢癌細胞內(nèi)凋亡通路相關因子FAK、p38MAPK(后簡稱p38)總蛋白表達和磷酸化水平的變化及其與DLC1蛋白表達的相關性,測定轉(zhuǎn)染前后細胞凋

3、亡率及周期分布的變化,計算轉(zhuǎn)染前后細胞對順鉑耐藥性的變化,進一步分析DLC1基因?qū)VCAR-3細胞順鉑耐藥性的影響及其可能的作用機制。
　　 方法:將OVCAR-3細胞分為3組,空白組為未經(jīng)處理的OVCAR-3細胞,陰性對照組OVCAR-3細胞轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒。pEGFP-C3,實驗組OVCAR-3細胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pEGFP-C3-DLC1。RT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染前后OVCAR-3細胞中DLC1基因表達變化,Western blot

4、ting方法檢測各組細胞中DLC1、FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、p38和磷酸化p38(p-p38)蛋白的表達變化,四甲基偶氮唑藍(MTT)法測定不同順鉑濃度梯度下A492值,計算轉(zhuǎn)染前后不同順鉑濃度梯度下OVCAR-3細胞的生長抑制率和對順鉑的半數(shù)抑制濃度(IC50),流式細胞儀測定順鉑處理前后各組細胞凋亡率及周期分布改變,p-FAK、p-p38蛋白的表達水平變化與各組細胞對順鉑IC50的關系行Pearson相關性分析。

5、　　 結果:DLC1基因和蛋白在實驗組表達而在空白對照組和陰性對照組均未見表達,實驗組細胞與其余2組細胞相比,對順鉑的IC50(μmol／L)較低(4.02 vs4.99／4.90,p=0.00),p-p38／β-actin蛋白表達上升而p-FAK／β-actin蛋白表達下降(3.02 vs1.52／1.61,3.13 vs9.03／8.99,P=0.00),順鉑處理前后實驗組與其余2組細胞相比凋亡率增加(8.97％vs1.81％／1

6、.95％,30.68％vs18.03％／20.33％,P=0.00),G1期細胞比例增加(65.80％vs60.82％／59.80％,66.48％vs55.42％／53.94％,P=0.00。p-FAK蛋白的表達水平與3組細胞對順鉑的IC50呈正相關(r=0.89,P=0.00),p-p38蛋白的表達水平與3組細胞對順鉑的IC50呈負相關(r=-0.90,P=0.00)。
　　 結論:OVCAR-3細胞內(nèi)未見DLC1基因及蛋白的