香蕉內(nèi)表生木霉的分布、種群結(jié)構(gòu)及對(duì)香蕉枯萎病的生防作用研究.pdf

1、通過(guò)對(duì)五種培養(yǎng)基的篩選獲得了兩種對(duì)木霉選擇效率高，專一性好的木霉選擇培養(yǎng)基(TSB和改良的TSM培養(yǎng)基)。利用這兩種選擇培養(yǎng)基，從香蕉(Musa sapientum L.)根系中分離得到187株木霉，其中29株為內(nèi)生木霉。香蕉木霉共分布在七個(gè)種內(nèi)，表生木霉五個(gè)種，為棘孢木霉(Trichoderma asperellum)，深綠木霉(T. atroviride)，綠色木霉(T. virens)，哈茨木霉(H. lixii)，康氏木霉(T.

2、 koningii)；內(nèi)生四個(gè)種，為棘孢木霉(T. asperellum)，短密木霉(T。brevicompactum)，綠色木霉(T. virens)，黃綠木霉(T. aureoviride)。哈茨木霉，康氏木霉，深綠木霉僅在香蕉根表存在而短密木霉，黃綠木霉僅在香蕉根內(nèi)有分布。棘孢木霉為內(nèi)表生木霉中最大的種群，分別占內(nèi)表生木霉種群的61.3％，60.7％，綠色木霉為第二大種，內(nèi)表生比例分別為22.7％，10.7％。 為了了解香

3、蕉內(nèi)表生木霉各個(gè)種群的遺傳分化及多樣性特征，對(duì)六對(duì)AFLP引物進(jìn)行了篩選，獲得兩對(duì)引物：E-AG/M-CTG、E-AT/M-CAG，能夠擴(kuò)增得到多態(tài)性高、條帶清晰的AFLP圖譜。AFLP分析顯示香蕉根系木霉具有很高的基因多樣性，種間的多樣性達(dá)到了100％，遺傳距離為0.2292到0.4035，而遺傳相似度從0.6680到0.7952。木霉種內(nèi)的多樣性，不同的木霉種之間有較大的差異。在香蕉根系木霉中兩個(gè)最大的木霉種群棘孢木霉及綠色木霉中，

4、外生種群的遺傳多樣樣都要高于內(nèi)生種群，表明了內(nèi)表生環(huán)境對(duì)木霉的遺傳多樣性具有一定的影響。 為了驗(yàn)證木霉的內(nèi)生化能力，我們通過(guò)組培苗接種再分離及顯微觀察等手段對(duì)木霉在香蕉體內(nèi)的分布情況進(jìn)行了研究。利用無(wú)菌苗及溫室回接實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)了內(nèi)生木霉棘孢木霉，綠色木霉的內(nèi)生化能力。結(jié)果顯示木霉能夠在香蕉的葉，莖，球莖，根部存在，并且生長(zhǎng)繁殖；顯微觀察同時(shí)發(fā)現(xiàn)，木霉在香蕉內(nèi)部既能在細(xì)胞間隙中生長(zhǎng)還能夠在香蕉細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)，并且以菌絲體和孢子狀態(tài)存在。

5、 通過(guò)對(duì)峙法，雙層平板法，顯微觀察法檢測(cè)了香蕉根部木霉的拮抗活性。在棘孢木霉中，55.2％的菌株能夠覆蓋鐮刀菌菌落以限制鐮刀菌的生長(zhǎng)，37.9％的菌株具有較高的對(duì)峙抑制作用；而在綠色木霉中38.4％的菌株能夠覆蓋鐮刀菌菌落，53.8％的菌株有較高的對(duì)峙抑制作用；棘孢木霉與綠色木霉部分菌株對(duì)枯萎病病原菌具有較強(qiáng)的生防活性，特別是綠色木霉既表現(xiàn)出了能夠分泌活性物質(zhì)的能力，還能夠通過(guò)菌絲的相互作用來(lái)抑制鐮刀菌的生長(zhǎng)，而且在對(duì)峙法中還表

6、現(xiàn)出了很強(qiáng)的拮抗能力。通過(guò)溫室開(kāi)放實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步檢測(cè)活性菌株棘孢木霉D21、綠色木霉C6，我們發(fā)現(xiàn)兩者都能夠顯著的緩解香蕉枯萎病病情，使病情指數(shù)從37.15分別降低到19.55和25.25，具有較高的生防效果。 本論文的研究證明了香蕉根部存在著較為豐富的內(nèi)表生木霉種群，揭示了棘孢木霉是香蕉根表及根內(nèi)的優(yōu)勢(shì)種。香蕉根表生木霉比內(nèi)生木霉具有更加豐富的基因多樣性，而內(nèi)生木霉具有較高的遺傳穩(wěn)定性；提示了內(nèi)表生環(huán)境對(duì)木霉的遺傳多樣性具有一定的