瑞氏木霉β-內(nèi)切葡聚糖酶的分子改造.pdf_第1頁(yè)
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1、該課題組已經(jīng)從用釀酒酵母H158構(gòu)建的瑞氏木霉cDNA文庫(kù)中獲得了內(nèi)切葡聚糖酶Ⅲ的基因eg3,它所編碼的酶蛋白在pH4.8-5.0時(shí)CMC酶活力最高,在pH7.0時(shí)活力很低.這顯然不適應(yīng)造紙、紡織、洗滌劑等行業(yè)的生產(chǎn)要求.為了獲得堿性條件下酶活提高的耐堿性突變株,該文采用易錯(cuò)PCR技術(shù)和致錯(cuò)突變株技術(shù),建立了突變體文庫(kù).經(jīng)過(guò)改進(jìn)的雙層平板檢測(cè)法篩選和液體酶活驗(yàn)證,獲得的耐堿性突變株H158(mall)最適作用pH在5.4.測(cè)序結(jié)果顯示,

2、在321位的氨基酸由Asn轉(zhuǎn)變?yōu)門hr.對(duì)此點(diǎn)進(jìn)行的定點(diǎn)誘變顯示,當(dāng)Asn變?yōu)镠is后,酶作用的pH曲線變寬,在pH4-6之間都有較高的酶活力,且整個(gè)酶活力沒(méi)有損失.當(dāng)Asn轉(zhuǎn)變?yōu)锳sp時(shí),酶的最適pH發(fā)生酸偏,在4左右,且整個(gè)酶活力大幅下降.由此可以確定,第321位的氨基酸是決定此酶最適pH的關(guān)鍵點(diǎn).對(duì)EG I,EG III和EG C采用常規(guī)蛋白分離方法分離純化,得到較純的酶蛋白.紅外光譜掃描顯示:EG C與EG I、EG III之間

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