興安落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)研究.pdf

1、興安落葉松(Larix gmelinii)是我國東北地區(qū)主要的造林樹種，近年來對其優(yōu)良種源的需求逐漸增大。而由于其結(jié)實(shí)量不穩(wěn)定且種子具有休眠特性，難以滿足目前的生產(chǎn)需求。因此，本研究以成熟和未成熟合子胚為材料，系統(tǒng)研究了興安落葉松胚性愈傷組織誘導(dǎo)的影響因素，以期確立高效、穩(wěn)定的興安落葉松胚性細(xì)胞系，并為其體胚發(fā)生體系的建立提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要結(jié)果如下： (1)以成熟合子胚為材料的誘導(dǎo)過程中發(fā)現(xiàn)，種源、培養(yǎng)基類型、激素種類、低溫處理

2、以及帶胚乳與否，都對興安落葉松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)產(chǎn)生了明顯的影響。內(nèi)蒙種源誘導(dǎo)率顯著高于加格達(dá)奇種源的誘導(dǎo)率(p<0.05)，S培養(yǎng)基優(yōu)于MS、DCR及其它幾種培養(yǎng)基，2,4-D的誘導(dǎo)作用遠(yuǎn)大于NAA，經(jīng)過低溫處理(4℃，1個(gè)月)的成熟種子以及帶胚乳培養(yǎng)都有利于誘導(dǎo)。 (2)未成熟合子胚的胚性愈傷組織誘導(dǎo)與外植體采集的時(shí)間關(guān)系密切。在6月中上旬取材的外植體誘導(dǎo)率為0；而6月下旬～7月上旬取材的外植體(即，處于前子葉期、子葉初期)

3、，胚性愈傷組織的平均誘導(dǎo)率高(33.92％，40.19％)，且胚性愈傷組織狀態(tài)好，7月下旬以后隨著合子胚發(fā)育逐漸成熟，胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率明顯下降。 (3)不同激素組合和濃度配比對胚性愈傷組織誘導(dǎo)率影響不同，且合子胚不同發(fā)育時(shí)期受激素作用的程度也不相同，處于胚胎選擇時(shí)期的外植體，無論激素濃度是多少，胚性愈傷組織誘導(dǎo)率都是0，而前子葉期胚在1 mg/L2,4-D、0.1 mg/LBA、0.5 mg/LKT時(shí)達(dá)到最高的誘導(dǎo)率(53.

4、71％)。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)2,4-D起主要作用，但是BA、KT的加入可顯著提高胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率。此外，當(dāng)瓊脂濃度為4 mg/L時(shí)，胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。 (4)選擇合適的繼代時(shí)間對胚性愈傷組織的增殖影響也較大，當(dāng)愈傷組織培養(yǎng)17～24 d時(shí)，繼代于瓊脂濃度為5 g·L<'-1>的培養(yǎng)基中效果較好，時(shí)間過長可能使胚性愈傷組織失去胚性而不能進(jìn)一步生長發(fā)育。增殖階段仍就需要一定量的激素，首次繼代培養(yǎng)在添加0.5 mg/L、2,4-D

5、、0.05 mg<,-1>BA和0.25 mg/LKT時(shí)效果最好，增長量可以達(dá)到1.5 g，而后激素濃度降低至原來的的十分之一。若直接轉(zhuǎn)接到無激素的培養(yǎng)基中，外植體將褐化死亡。 (5)成熟培養(yǎng)基中加入適量濃度的ABA(2 mg/L)，胚性愈傷組織就會(huì)分化出柱狀后期原胚。添加適量的PEG、肌醇也可以起到促進(jìn)分化的作用，但是體胚的生長狀態(tài)不好，也沒有分化出子葉胚；ABA和PEG合用，無明顯效果。將子葉形胚轉(zhuǎn)移到不含任何激素的萌發(fā)