延胡索醇提物和延胡索生物堿體內(nèi)抗血管生成及其對(duì)VEGF調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]：
　　 探討延胡索醇提物及延胡索生物堿體內(nèi)抗血管生成的作用及對(duì)VEGF的調(diào)控作用。
　　 [方法]:
　　 1．利用MTT法，檢測(cè)延胡索醇提物及延胡索生物堿對(duì)人胃癌細(xì)胞株BGC-823、人肺腺癌細(xì)胞株A549、人結(jié)腸癌細(xì)胞株LOVO以及人肝癌細(xì)胞株HepG-2的增殖抑制作用，篩選最敏感腫瘤細(xì)胞株；
　　 2．以最敏感腫瘤細(xì)胞株為對(duì)照，利用MTT法測(cè)定延胡索醇提物及延胡索生物堿對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)

2、胞(HUVEC)的增殖抑制作用；
　　 3．通過建立雞胚尿囊膜(CAM)模型，觀察延胡索醇提物及延胡索生物堿在體內(nèi)對(duì)新生血管的抑制作用；
　　 4．采用WesternBlot法觀察并比較延胡索醇提物及延胡索生物堿對(duì)A549細(xì)胞、HUVEC細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響；并觀察延胡索生物堿對(duì)AKT，MAPK,NF-κB信號(hào)通路的影響。
　　 [結(jié)果]:
　　 1．延胡索醇提物及延胡索生物堿在12.5μg/ml～20

3、0μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)HepG2、A549、LOVO以及BGC-823細(xì)胞均有一定的增殖抑制作用。延胡索醇提物作用于以上四種腫瘤細(xì)胞后IC50分別為：167.845μg/ml，153.078μg/ml，158.894μg/ml，155.865μg/ml;而延胡索生物堿作用四種細(xì)胞后的IC50分別為：89.971μg/ml,45.672μg/ml，109.187μg/ml以及62.62μg/ml。即延胡索醇提物及延胡索生物堿對(duì)人肺腺癌A

4、549細(xì)胞最為敏感。
　　 2．延胡索醇提物在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制率為6.77％～23.94%之間，同樣條件下作用于HUVEC48h后，抑制率在16.94%～42.6%之間；延胡索生物堿在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內(nèi)作用于A549細(xì)胞48h后的增殖抑制率在10.22%～36.15%之間，相同濃度范圍的延胡索生物堿作用HUVEC48h后，抑制率在19.03%～49.

5、94%之間。即延胡索醇提物和延胡索生物堿在相同濃度下，對(duì)HUVEC細(xì)胞的增殖抑制作用要優(yōu)于對(duì)A549的增殖作用，P值均＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故而認(rèn)為延胡索醇提物和延胡索生物堿對(duì)A549細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞體外增殖存在差異細(xì)胞毒作用。
　　 3．延胡索醇提物3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)雞胚絨毛尿囊膜新生血管的抑制率在8.68%～25.2%之間，延胡索生物堿在3.125μg/ml～25μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)

6、雞胚尿囊膜的新生血管的抑制率在19.32%～50.2%之間。故而，認(rèn)為延胡索生物堿在體內(nèi)具有較好的抗血管生成的作用，而在相同條件下，延胡索醇提物對(duì)雞胚絨毛尿囊膜的新生血管抑制作用相對(duì)較弱。
　　 4．延胡索生物堿可下調(diào)A549細(xì)胞VEGF的蛋白表達(dá)水平，在50μg/ml時(shí)即可降低VEGF的表達(dá)水平。而在相同條件下，延胡索醇提物對(duì)VEGF蛋白表達(dá)并無明顯影響。延胡索生物堿在12.5μg/ml～200μg/ml濃度范圍對(duì)A549細(xì)胞

7、中NF-κB信號(hào)通路上的p65，p50，IκB-a的蛋白水平以及IκB-a的磷酸化水平均無明顯的影響；而在200μg/ml時(shí)可降低Akt蛋白磷酸化水平，其磷酸化的水平與對(duì)照組相比可以較明顯的降低；對(duì)MAPK3s途徑中Erk、P38、JNK信號(hào)通路上的Erk、P38、JNK的蛋白及其磷酸化水平并無明顯影響。
　　 在亞細(xì)胞毒作用濃度范圍3.125μg/ml～25μg/ml的延胡索醇提物對(duì)HUVEC細(xì)胞VEGF表達(dá)無明顯影響，而在同

8、樣的條件下，延胡索生物堿可顯著抑制其VEGF的表達(dá)水平，在12.5μg/ml時(shí)即可降低其表達(dá)，并呈現(xiàn)出劑量依賴性。
　　 [結(jié)論]：
　　 延胡索生物堿在體外對(duì)HepG2細(xì)胞、A549細(xì)胞、LOVO細(xì)胞、BGC-823細(xì)胞均具有較強(qiáng)的增殖抑制作用，而延胡索醇提物體外對(duì)四種腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用相對(duì)較弱；延胡索醇提物及延胡索生物堿體內(nèi)均具有一定的抗血管生成作用；延胡索生物堿可降低A549細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞中VEGF的表達(dá)