延胡索生物堿譜-效關系及相互作用研究.pdf

1、延胡索俗稱元胡，是著名的“浙八味”之一，始載于《本草拾遺》，中國藥典收載其正品來源為罌粟科(Papaveraeeae)紫堇屬（Corydalis）植物延胡索（Corydalisyanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖，是中醫(yī)藥學中傳統的活血、行氣、止痛藥，應用歷史悠久，在中樞神經系統、心血管系統等多方面具有顯著作用。
　　到目前為止，對延胡索的研究多局限于延胡索乙素或其衍生物等叔胺堿的研究，對季銨堿成分的研究尚少報道，更未見

2、不同類型生物堿與其功效的相關性以及相互作用研究。因此，本論文以季銨堿的抗心肌缺血活性為重點研究譜效關系。
　　本論文應用高效液相色譜技術，對40種不同產地的延胡索藥材進行指紋圖譜分析，并運用國家藥典相似度分析軟件對HPLC指紋圖譜進行相似度分析，初步找出十個共有峰，還運用多種純化分離方法和結構鑒定技術(大孔樹脂、硅膠、MCI、UV、MS、1HNMR、13CNMR)對共有峰化學成分進行系統研究，從中分離得到6個化合物，分別為13-甲

3、基巴馬土賓、13-甲基脫氫紫堇達明堿、脫氫延胡索堿、脫氫紫堇鱗莖堿、黃連堿和非洲防己堿。
　　UPLC是近年來才興起的一種具有優(yōu)越的靈敏度和分離能力的分離檢測技術。本論文通過優(yōu)化液相分析條件，建立了延胡索不同類型生物堿的UPLC特征指紋圖譜，定量了37個樣品的共有峰峰面積，并對指紋圖譜進行了聚類分析和相似度分析。結果表明，不同產地的延胡索質量差別比較大，其中以37號樣品（產地浙江，購自北京同仁堂）為參照，發(fā)現產地浙江、四川、湖南的

4、醋制延胡索與其相似度較高，可以聚為一類，而陜西和山東的生品與其差距最遠。
　　應用UPLC-Q-TOF技術，在線快速指認和鑒定了原小檗堿型季銨堿共有峰的化學成分。
　　本論文通過MTT法，比較了37種不同產地的延胡索季銨堿對H9C2心肌細胞缺氧/復氧損傷的保護作用，得到譜效關系研究的藥效學評價指標。
　　還應用多元回歸分析，灰關聯度分析和相關分析等化學計量學方法對37種不同產地的延胡索季銨堿的化學指紋信息和藥效學指標進

5、行了譜效關系研究。結果表明，4號峰脫氫紫堇鱗莖堿對藥效貢獻最大，是延胡索季銨堿中重要的活性物質;3號峰13-甲基脫氫紫堇達明堿、1號峰非洲防己堿、2號峰黃連堿、8號峰脫氫延胡索堿和6號峰巴馬汀對藥效也都有正向貢獻作用;而5號峰13-甲基巴馬土賓和7號峰小檗堿與藥效相關性很低或者負相關，提示X4、X3、X1、X2、X8和X6共同構成了延胡索季銨堿抗心肌缺血的藥效物質成分群。本研究為中藥“譜效關系”的質控模式提供了理論依據和實踐探索。

6、>　　本論文通過測MTT對延胡索季銨堿共有峰單體化合物進行了藥效學評價，并計算出8個化合物的EC50。結果表明，黃連堿、脫氫延胡索堿和非洲防己堿對于心肌細胞缺氧/復氧模擬的心肌缺血/再灌注損傷模型的藥效活性最好，是延胡索季銨堿的重要活性物質;脫氫紫堇鱗莖堿，13-甲基脫氫紫堇達明堿以及巴馬汀也都有顯著的保護作用;而13-甲基巴馬土賓和小檗堿沒有明顯的心肌細胞缺氧/復氧保護作用它們6種物質共同組成了延胡索季銨堿抗心肌缺血的藥效物質基礎。。

7、這與多元回歸分析，灰關聯度分析和person相關分析的結果是基本一致的。因此，單體給藥很好的驗證了譜效分析方法的可靠性和準確性。
　　本論文通過小鼠熱板法和扭體法對延胡索叔胺堿和季銨堿以及兩者1∶1配伍給藥的鎮(zhèn)痛作用進行了比較。結果表明，對于熱傳導引起的中樞疼痛，叔胺堿有明顯鎮(zhèn)痛作用，季銨堿和混合組都沒有明顯中樞鎮(zhèn)痛作用。對于腹腔注射醋酸導致的外周疼痛，季銨堿有明顯鎮(zhèn)痛作用，叔胺堿無明顯鎮(zhèn)痛作用，且兩者混合后，對季銨堿的鎮(zhèn)痛作用沒