原白頭翁素衍生物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株的誘導(dǎo)凋亡和抗增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討原白頭翁素衍生物（5-溴甲基-呋喃-2酮）對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株的誘導(dǎo)凋亡和抗增殖作用及其機(jī)制，為開發(fā)抗腫瘤新中藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用MTT法測(cè)定原白頭翁素衍生物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用；通過(guò)倒置顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色熒光顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)藥物處理前后增殖細(xì)胞核抗原Ki-67及凋亡相關(guān)基因Bcl-

2、2、Bax的基因蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：MTT法檢測(cè)結(jié)果，5μg/ml-20μg/ml原白頭翁素衍生物對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株有明顯的抑制生長(zhǎng)的作用，且呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間的依賴性。倒置顯微鏡觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)凝集，細(xì)胞間連接疏松，貼壁能力減弱； HE染色觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細(xì)胞膜起泡形成凋亡小體；AO/EB熒光染色觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞核染色質(zhì)呈橘紅色，

3、胞質(zhì)內(nèi)的橘紅色或橘黃色熒光消失，細(xì)胞周圍可見亮綠色的凋亡小體。TUNEL染色法檢測(cè)結(jié)果，藥物在5μg/ml-20μg/ml范圍內(nèi)均能誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞株凋亡，腫瘤細(xì)胞凋亡率隨藥物濃度的增高而上升，表現(xiàn)出濃度依賴性關(guān)系，當(dāng)藥物作用48h其AI達(dá)高峰；免疫細(xì)胞化學(xué)ki-67抗原檢測(cè)結(jié)果，ki-67陽(yáng)性表達(dá)率隨藥物濃度的提高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，表現(xiàn)出濃度和時(shí)間的依賴性關(guān)系；凋亡相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組Bcl-2基因蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯