原白頭翁素衍生物體外誘導人乳腺癌MCF-7細胞凋亡.pdf

1、目的：探討原白頭翁素衍生物對人乳腺癌MCF-7細胞株的抗增殖和誘導凋亡作用及其機制，為開發(fā)抗腫瘤中藥提供實驗和理論依據。
　　方法：采用體外細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細胞；應用MTT法測定原白頭翁素衍生物對人乳腺癌MCF-7細胞株的抗增殖及細胞毒性作用；應用倒置顯微鏡、HE染色光鏡觀察法、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）雙染色熒光顯微鏡觀察法、掃描電鏡（SEM）來觀察腫瘤細胞的形態(tài)學及超微結構的變化；應用流式細胞術（FCM

2、）分析細胞周期分布和凋亡情況；應用TUNEL法檢測細胞凋亡；應用免疫細胞化學技術檢測藥物作用前后細胞增殖核抗原Ki-67，凋亡通路相關蛋白Bcl-2、Bax、Fas，凋亡蛋白激酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9，凋亡抑制蛋白Livin、Survivin以及核轉錄因子NF-κB的表達變化并深入探討原白頭翁素衍生物對人乳腺癌MCF-7細胞株的抑制增殖和誘導凋亡的作用機制。
　　結果：
　?。?）MTT法

3、檢測結果表明：1μg/ml-20μg/ml原白頭翁素衍生物（Br-、I-、OAC-）對人乳腺癌MCF-7細胞株均有明顯抑制作用，且呈現出濃度和時間依賴性，其中以Br基取代的衍生物抑制作用最強；
　?。?）形態(tài)學觀察：倒置顯微鏡觀察發(fā)現實驗組細胞體積變小變圓，核染色質凝集，細胞間連接疏松，貼壁能力減弱；HE染色結果發(fā)現實驗組細胞質脫水濃縮，伊紅染色增強，可見凋亡小體等典型的細胞形態(tài)學變化；掃描電鏡觀察發(fā)現細胞體積縮小，胞質濃縮，微絨

4、毛結構減少甚至消失；AO/EB熒光雙染色法觀察到了實驗組凋亡細胞有類似活細胞的正常核，但染色質為橙紅色，壞死細胞顯示橙紅色的濃縮，染色質碎裂；
　?。?）流式細胞儀分析結果：5μg/ml藥物作用24、48、72h后，出現明顯的細胞凋亡峰，且S期細胞明顯增多，而G1期細胞明顯減少，多數細胞阻滯在S期；
　?。?）TUNEL染色法檢測結果顯示：5μg/ml藥物作用24、48、72h后均能誘導乳腺癌MCF-7細胞凋亡，藥物作用48

5、h后的凋亡率與24h實驗組相比明顯增高，而72h的凋亡率下降，實驗組與對照組凋亡率相比均有統(tǒng)計學意義；
　?。?）免疫細胞化學（SABC法）檢測法發(fā)現實驗組細胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Fas和Bax的表達增加，Bcl-2、Ki-67、Livin、Survivin和NF-κB表達降低，與對照組相比較均有顯著差異。
　　結論：
　　1、原白頭翁素衍生物（Br-、I-、OAC-）對人乳腺癌