基因RUNX3對(duì)肺癌細(xì)胞株A549體外作用的研究.pdf

1、目的:本研究采用質(zhì)粒載體介導(dǎo)的人類RUNT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(runt related transcription factor3)在體外通過脂質(zhì)體感染肺癌細(xì)胞株A549，并檢測(cè)基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞的增殖、遷移、凋亡的作用。探索基因RUNX3對(duì)肺癌增殖、遷移、凋亡的影響，探究潛在的靶向治療肺癌新靶點(diǎn)。
　　方法:(1)本次實(shí)驗(yàn)對(duì)四個(gè)分組的A549細(xì)胞株進(jìn)行研究，四個(gè)分組分別設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組和空白組，實(shí)驗(yàn)組中加入過表達(dá)的R

2、unx3質(zhì)粒和脂質(zhì)體Lipofectamine(R)2000;陽性對(duì)照組中加入空載質(zhì)粒和脂質(zhì)體Lipofectamine(R)2000;陰性對(duì)照組中加入脂質(zhì)體Lipofectamine(R)2000;空白組中只有1640培養(yǎng)基;(2)將過表達(dá)RUNX3（EGFP-RUNX3）和質(zhì)粒(EGFP-NC)擴(kuò)增提取;(3)通過脂質(zhì)體Lipofectamine(R)2000轉(zhuǎn)染過表達(dá)RUNX3基因的質(zhì)粒載體（eGFP-RUNX3）并為實(shí)驗(yàn)組、Li

3、pofectamine(R)2000轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒(eGFP-NC)為設(shè)為陽性對(duì)照組、單加Lipofectamine(R)2000為陰性對(duì)照組、單加無血清培養(yǎng)基1640為空白對(duì)照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn);(4)使用QPCR檢測(cè)不同組別的RUNX3 mRNA表達(dá)量;(5)使用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同組別的細(xì)胞增殖情況;(6)應(yīng)用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同組別的細(xì)胞株遷移侵襲情況;(7)使用流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)不同組別的細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:(

4、1)本次研究成功提取到過表達(dá)Runx3基因質(zhì)粒和空載質(zhì)粒，并成功轉(zhuǎn)染到細(xì)胞株;(2)熒光定量PCR(QPCR)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組Runx3基因的mRNA表達(dá)量最高，顯著高于各個(gè)對(duì)照組(P＜0.01);(3)CCK-8法分別測(cè)定(12h24h48h72h96h)各組的細(xì)胞增殖，結(jié)果表明各種細(xì)胞隨著時(shí)間的推移均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，在增殖實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染后72小時(shí)實(shí)驗(yàn)組過表達(dá)RUNX3OD值(0.883±0.15)，陽性對(duì)照組(1.638±0.17)

5、，陰性對(duì)照組(1.631±0.12)，空白組(1.788±0.18)，實(shí)驗(yàn)組明顯低于各個(gè)對(duì)照組(P＜0.01);(4)侵襲實(shí)驗(yàn)中在200倍高倍鏡下隨機(jī)選取三個(gè)視野統(tǒng)計(jì)平均細(xì)胞數(shù)量，實(shí)驗(yàn)組，陽性對(duì)照組，陰性對(duì)照組，空白組分別為(28±3.33)，(100±2.66)，(110±2.33)，(180±3.66)，實(shí)驗(yàn)組明顯低于各個(gè)對(duì)照組(P＜0.01);(5)AnnexinV/PI雙染色法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡及壞死比例，結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組