趨化因子CXCL10在小鼠暴發(fā)型肝衰竭中對NK細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：在HBV引起的人類暴發(fā)型肝衰竭(fulminant hepatic failure，F(xiàn)HF)及慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)中，NK細(xì)胞可以通過趨化因子/趨化因子受體的途徑向肝臟炎性中心募集，募集至肝臟的NK細(xì)胞發(fā)生活化并通過多種途徑導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。通過建立Ⅲ型鼠肝炎病毒（MHV-3）誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型，對趨化因子受體CXCR3及其配體CXCL10在該募集活化過程中

2、所起的作用進(jìn)行研究，以期為人類病毒性暴發(fā)型肝衰竭及慢加急性肝衰竭中NK細(xì)胞的作用機(jī)制提供新的研究線索。
　　 方法：1.通過向Balb/cJ小鼠腹腔注射Ⅲ型鼠肝炎病毒（MHV-3）建立暴發(fā)型肝衰竭模型；2.利用Tranwell 趨化試驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測：①M(fèi)HV-3感染36小時(shí)后肝細(xì)胞對各組織來源NK細(xì)胞的趨化能力；②經(jīng)CXCL10中和抗體阻斷后的MHV-3感染肝細(xì)胞對NK細(xì)胞的趨化能力；③正常肝細(xì)胞對個(gè)組織來源NK細(xì)胞的趨

3、化能力；④人工重組鼠CXCL10蛋白對各組織來源NK細(xì)胞的趨化能力；3.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)CXCL10刺激后NK細(xì)胞的表面活化標(biāo)記分子CD69的表達(dá)水平；4.利用胞內(nèi)因子染色法，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測CXCL10刺激后NK細(xì)胞IFNγ和TNFα的分泌水平。
　　 結(jié)果：1.在MHV-3 誘導(dǎo)小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型中，與陰性對照組相比，MHV-3感染36小時(shí)小鼠的肝細(xì)胞與人工重組鼠CXCL10蛋白在體外對脾臟、骨髓及外周血來源的小鼠NK

4、細(xì)胞均具有顯著的趨化效果（P<0.05），其中CXCL10蛋白的趨化能力遜于MHV-3感染36小時(shí)的小鼠肝細(xì)胞（P<0.05）；趨化因子CXCL10的單克隆中和抗體可在一定程度上阻斷MHV-3感染36小時(shí)小鼠肝細(xì)胞對NK細(xì)胞的趨化效果（P<0.05）；2.經(jīng)CXCL10蛋白體外刺激12小時(shí)后，小鼠NK細(xì)胞的表面活化標(biāo)記CD69的表達(dá)水平及細(xì)胞因子IFNγ和TNFα的分泌水平同刺激前相比無顯著差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：1